【摘要】：目的建立高分辨率熔解曲線(HRM)分析技術(shù)檢測(cè)人甘露糖結(jié)合凝集素相關(guān)絲氨酸蛋白酶-2(MASP-2)基因g.21370(GT)位點(diǎn)單核苷酸多態(tài)性(SNP)的方法并進(jìn)行評(píng)價(jià)。方法通過(guò)測(cè)序獲得MASP-2基因g.21370(GT)位點(diǎn)3種不同基因型對(duì)照品,并用其建立HRM技術(shù)檢測(cè)MASP-2基因點(diǎn)突變方法。利用60份待測(cè)DNA樣品對(duì)建立的HRM方法的準(zhǔn)確性、重復(fù)性及穩(wěn)定性進(jìn)行評(píng)價(jià)。結(jié)果建立的MASP-2基因HRM分析方法擴(kuò)增反應(yīng)正常,G/G、G/T、T/T 3種基因型區(qū)分明顯,擴(kuò)增產(chǎn)物Melt曲線良好,無(wú)非特異性產(chǎn)物出現(xiàn);與基因序列測(cè)定結(jié)果對(duì)比顯示準(zhǔn)確性良好;對(duì)野生型和突變型標(biāo)本3次重復(fù)檢測(cè)結(jié)果顯示,Tm值變異系數(shù)為0.017和0.023;χ~2檢驗(yàn)結(jié)果表明,本研究選取的隨機(jī)體檢人群MASP-2基因g.21370(GT)位點(diǎn)基因型頻率分布符合Hardy-Weinberg遺傳平衡。結(jié)論建立的MASP-2基因g.21370(GT)位點(diǎn)HRM檢測(cè)方法準(zhǔn)確性高、重復(fù)性及穩(wěn)定性良好,為下一步臨床分析MASP-2基因SNP提供一定的技術(shù)支持。
[Abstract]:Objective to establish a high resolution fusion curve (HRM) assay for the detection of single nucleotide polymorphism (SNP) (SNP) at g. 21370 (GT) site of human mannose binding lectin associated serine protease (MASP-2) gene. Methods three different genotypes of MASP-2 gene G. 21370 (GT) locus were obtained by sequencing and the point mutation of MASP-2 gene was detected by HRM technique. The accuracy, repeatability and stability of the established HRM method were evaluated with 60 DNA samples. Results the HRM analysis method of MASP-2 gene showed that the three genotypes of G / G / T / T were distinguished obviously, the Melt curve of amplification product was good, and the results of gene sequence analysis showed good accuracy compared with the results of gene sequence analysis. The coefficients of variation of Tm were 0.017 and 0.023.The results of 蠂 ~ 2 test showed that the genotype frequency distribution of MASP-2 gene g.21370 (GT) locus was consistent with the Hardy-Weinberg genetic balance. Conclusion the established HRM detection method of (GT) locus g. 21370 of MASP-2 gene is accurate, reproducible and stable, which provides some technical support for clinical analysis of MASP-2 gene SNP.
【作者單位】： 河北北方學(xué)院醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)學(xué)院;河北北方學(xué)院附屬第一醫(yī)院檢驗(yàn)科;
【基金】：河北省張家口市科學(xué)技術(shù)研究與發(fā)展計(jì)劃(No:1421109D)
【分類號(hào)】：R440

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2205066