【摘要】：γ-聚谷氨酸(γ-poly glutamic acid,γ-PGA)特殊的分子結(jié)構(gòu),使其具有很好的乳化、增稠、抗凍等特性,可作為添加劑廣泛應(yīng)用于食品當(dāng)中。實(shí)驗(yàn)以枯草芽孢桿菌Bacillus subtilis 115基因組為模板,通過PCR技術(shù)成功克隆到γ-PGA合成酶系基因pgs BCA,并進(jìn)行測(cè)序,利用Ex PASy-Prot Param tool、Server 3.0 Signal P,TMHMM Server和Tmpred,PSORTB,Predict Protein,Swiss-Model Workspace軟件,分別對(duì)蛋白質(zhì)的生物信息進(jìn)行了分析和預(yù)測(cè),針對(duì)γ-PGA合成關(guān)鍵酶基因pgs B構(gòu)建了表達(dá)體系,結(jié)果表明:pgs B,pgs C和pgs A基因分別含1182、450和1143個(gè)核苷酸,分別編碼393、149和380個(gè)氨基酸,其對(duì)應(yīng)蛋白均不存在信號(hào)肽,屬于非分泌型蛋白;Pgs B、Pgs C和Pgs A分子量分別為44016.7、16302.9、42759.8 Da;Pgs B為親水性不穩(wěn)定的酸性蛋白質(zhì),二級(jí)結(jié)構(gòu)以α-螺旋為主;Pgs C是疏水堿性的膜結(jié)合蛋白,存在4個(gè)強(qiáng)跨膜區(qū);Pgs A為親水穩(wěn)定的堿性蛋白,在N端存在1個(gè)強(qiáng)跨膜區(qū)域。經(jīng)聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)檢測(cè),pgs B基因被成功表達(dá),目的蛋白相對(duì)分子質(zhì)量約為45 k Da,與預(yù)測(cè)值基本相符。
[Abstract]:緯 -poly glutamic acid (緯 -PGA) has good emulsification, thickening and anti-freezing properties, and it can be widely used as additive in food. Using the genome of Bacillus subtilis Bacillus subtilis 115 as template, the 緯 -PGA synthase gene pgs BCA was cloned by PCR technique and sequenced. The ex PASy-Prot Param tool Server 3.0 Signal PTMHMM Server and TmpredPSORTB Predict protein Swiss-Model Workspace software were used. The biological information of protein was analyzed and predicted, and the expression system of 緯 -PGA biosynthesis key enzyme gene pgs B was constructed. The results showed that the pgs C and pgs A genes contained 1182450 and 1143 nucleotides respectively, encoding 393149 and 380 amino acids, respectively. Their corresponding proteins have no signal peptide. The molecular weights of PGS BGS C and Pgs A are 44016.7C and 16302.9U 42759.8, respectively. The secondary structure of PGS C is hydrophobic basic membrane binding protein, and its secondary structure is 偽 -helix. There were four strong transmembrane regions (PGS A) as hydrophilic and stable basic proteins, and one strong transmembrane region in N terminal. The PGS B gene was successfully expressed by polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE). The relative molecular weight of the target protein was about 45 kDa, which was consistent with the predicted value.
【作者單位】： 哈爾濱商業(yè)大學(xué)食品工程學(xué)院黑龍江省高等學(xué)校食品科學(xué)與工程重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;
【基金】：國家支撐計(jì)劃項(xiàng)目(2012BAD32B08) 研究生創(chuàng)新科研資金項(xiàng)目(YJSCX2015-356HSD)
【分類號(hào)】：Q78;TS202.3

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本文編號(hào)：2198931