【摘要】：斑節(jié)對(duì)蝦(Penaeus monodon)占據(jù)水產(chǎn)養(yǎng)殖重要的地位,同時(shí)因斑節(jié)對(duì)蝦所具有的較高的產(chǎn)量和良好的質(zhì)量,個(gè)體大、生長(zhǎng)快、肉質(zhì)鮮美和營(yíng)養(yǎng)豐富等優(yōu)點(diǎn)深受人們的喜愛(ài),所以斑節(jié)對(duì)蝦的市場(chǎng)前景廣闊。但是現(xiàn)在斑節(jié)對(duì)蝦養(yǎng)殖業(yè)的發(fā)展深受病害的制約,病害的爆發(fā)致使斑節(jié)對(duì)蝦養(yǎng)殖業(yè)遭受巨大的損失。所以為斑節(jié)對(duì)蝦的病害防治而深入研究其免疫防御機(jī)理,進(jìn)而探索一條新的免疫防治途徑。本研究為免疫防御機(jī)制的研究奠定了基礎(chǔ)。JNK信號(hào)通路中JNK、C-JUN和ATF-2基因均在不同的環(huán)境應(yīng)激下激活,其中有滲透休克,紫外線輻射,熱休克,氧化應(yīng)激,細(xì)菌和病毒感染,并對(duì)蛋白質(zhì)合成抑制劑,化療劑,細(xì)胞死亡配體,免疫效應(yīng)子和促炎細(xì)胞因子的合成和分泌起重要作用。在本研究中利用SMART-RACE技術(shù)克隆出斑節(jié)對(duì)蝦免疫相關(guān)基因JNK信號(hào)通路中JNK、C-JUN和ATF-2基因c DNA全長(zhǎng)序列。通過(guò)qRT-PCR法研究了它們對(duì)革蘭氏陰性菌和革蘭氏陽(yáng)性菌刺激下的表達(dá)模式,并結(jié)合RNA干擾靶基因特異性沉默對(duì)JNK信號(hào)通路部分基因JNK、C-JUN和ATF-2基因及抗菌肽進(jìn)行了關(guān)聯(lián)分析。初步得到如下結(jié)果:PmJNK序列全長(zhǎng)2645bp,包含一個(gè)147bp的5′非編碼區(qū)(UTR)、1235 bp的3′非編碼區(qū)(3′UTR),和1263 bp的開放閱讀框(Open reading frame,ORF),編碼421個(gè)氨基酸的多肽,其理論相對(duì)分子量和理論等電點(diǎn)約為47.5 kDa和6.47。PmC-JUN序列全長(zhǎng)1875bp包含一個(gè)134bp的5′非編碼區(qū)(UTR)、844 bp的3′非編碼區(qū)(3′UTR),和879 bp的開放閱讀框(Open reading frame,ORF),編碼293個(gè)氨基酸的多肽,其理論相對(duì)分子量和理論等電點(diǎn)約為32.58 kDa和7.79。PmATF-2序列全長(zhǎng)2291bp包含一個(gè)312bp的5′非編碼區(qū)(UTR)、398 bp的3′非編碼區(qū)(3′UTR),和1581 bp的開放閱讀框(Open reading frame,ORF),編碼527個(gè)氨基酸的多肽,其理論相對(duì)分子量和理論等電點(diǎn)約為55.6 kDa和7.11。利用體外重組蛋白技術(shù)初步探究JNK信號(hào)通路部分基因JNK、C-JUN和ATF-2基因的蛋白在體外表達(dá)情況,體外重組蛋白的成功為今后深入探究JNK信號(hào)通路中JNK、C-JUN和ATF-2基因在斑節(jié)對(duì)蝦免疫應(yīng)答的調(diào)控功能奠定了基礎(chǔ)。在對(duì)斑節(jié)對(duì)蝦模式分析的過(guò)程中發(fā)現(xiàn),PmJNK mRNA的表達(dá)量在血淋巴和，

本文編號(hào)：2196053