【摘要】：通過(guò)構(gòu)建GmPEPc基因的植物RNAi雙元表達(dá)載體,并通過(guò)農(nóng)桿菌介導(dǎo)的大豆子葉節(jié)遺傳轉(zhuǎn)化方法將控制油脂和蛋白合成途徑的相關(guān)基因GmPEPc轉(zhuǎn)入受體品種沈農(nóng)9號(hào)中,通過(guò)抑制大豆內(nèi)源GmPEPc基因的表達(dá),增加油脂積累,從而獲得高油的轉(zhuǎn)基因大豆新品種。在大豆組織培養(yǎng)過(guò)程中,共切取大豆外植體407塊,獲得T0代轉(zhuǎn)化苗35株,轉(zhuǎn)化率8.9%。通過(guò)對(duì)轉(zhuǎn)基因后代中目的基因的整合及表達(dá)情況進(jìn)行分子鑒定。獲得23株T_1代轉(zhuǎn)基因后代,其中高抗草丁膦除草劑(噴施濃度300 mg·mL~(-1))14株,通過(guò)PCR檢測(cè)結(jié)果表明其中12株為PCR陽(yáng)性;PCR和Southern雜交檢測(cè)表明,GmPEPc基因已經(jīng)成功插入到轉(zhuǎn)基因大豆植株基因組DNA中。對(duì)T_1代測(cè)定結(jié)果顯示,轉(zhuǎn)基因大豆籽粒的平均含油量比對(duì)照高9.51%,平均蛋白質(zhì)含量下降5.44%。這些研究結(jié)果為篩選高油脂含量的轉(zhuǎn)基因大豆新株系提供了依據(jù),為下一步高油新品種的選育提供了種質(zhì)基礎(chǔ)。
[Abstract]:By constructing the plant RNAi double expression vector of GmPEPc gene, and by Agrobacterium tumefaciens mediated genetic transformation of soybean cotyledon node, the related gene GmPEPc, which controls the pathway of oil and protein synthesis, was transferred into the recipient variety Shennong 9. By inhibiting the expression of endogenous GmPEPc gene in soybean and increasing the accumulation of oil, a new transgenic soybean variety with high oil content was obtained. In the process of soybean tissue culture, 407 explants of soybean were cut and 35 seedlings of T 0 generation were obtained. The transformation rate was 8.9%. The integration and expression of target genes in transgenic progenies were identified by molecular identification. Twenty-three transgenic progenies of T _ 1 generation were obtained, of which 14 were highly resistant to herbicide (300 mg mL ~ (-1). The results of PCR and Southern hybridization showed that the GmPEPc gene had been successfully inserted into the genomic DNA of transgenic soybean plants. The average oil content of transgenic soybean seeds was 9.51% higher than that of the control, and the average protein content was 5.44% lower than that of the control. These results provide a basis for screening transgenic soybean lines with high oil content and provide a germplasm basis for the selection of new high-oil soybean varieties in the next step.
【作者單位】： 吉林省農(nóng)業(yè)科學(xué)院吉林省農(nóng)業(yè)生物技術(shù)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;東北農(nóng)業(yè)大學(xué)資源與環(huán)境學(xué)院;東北師范大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院;
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金青年基金(31501327) 吉林省科技發(fā)展計(jì)劃-青年科研基金項(xiàng)目(20150520123JH)
【分類(lèi)號(hào)】：S565.1

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2196093