【摘要】：目的:通過“吐魯番斗雞攻擊行為的表型與基因型分析”探討吐魯番斗雞攻擊行為表型和基因型的遺傳特點,尋找可作為吐魯番斗雞攻擊行為的分子標記,把分子標記輔助選擇應用于吐魯番斗雞攻擊行為的選育,為吐魯番斗雞攻擊行為的分子育種奠定基礎。方法:選擇攻擊性強的吐魯番斗雞與攻擊性弱的新羅曼蛋雞雜交產生F1代,采用熒光定量PCR技術確定SLC6A4基因與NR2E1基因在攻擊性強的吐魯番斗公雞、攻擊性弱的新羅曼蛋公雞和F1代的大腦從出殼到性成熟不同時期階段的表達變化;通過F1代雞全同胞交配產生F2代,采集親本、F1代和F2代三代四種類型雞的血液樣本,通過PCR-SSCP方法檢測與攻擊行為相關的SLC6A4基因與NR2E1基因全部外顯子區(qū)和部分內含子區(qū)的SNP多態(tài)性,然后采用“鏡像自斗法”和“配對打斗法”測定親本、F1代的攻擊行為表型,然后通過攻擊行為表型與攻擊行為相關的基因型之間進行方差分析驗證SLC6A4基因和NR2E1基因與吐魯番斗雞攻擊行為的關聯性。結果:(1)通過對SLC6A4基因表達量在7個時期的分析發(fā)現其趨勢成波浪形,0月齡、3月齡、6月齡都有較高的表達;在三種雞群中不同時間段的表達量中發(fā)現SLC6A4的表達量與攻擊行為呈正相關。NR2E1基因在7個時期的表達量呈逐漸升高趨勢,且表達量均在6月齡達到最高;三種雞群中不同時間段的表達量中發(fā)現NR2E1的表達量與攻擊行為呈負相關。表明SLC6A4基因、NR2E1基因與吐魯番斗雞的攻擊行為具有一定的相關,為后續(xù)的SLC6A4基因和NR2E1基因多態(tài)性分析奠定了理論基礎,旨在獲得SLC6A4基因和NR2E1基因的分子標記,為吐魯番斗雞的分子標記輔助選擇提供參考依據。(2)在SLC6A4基因的外顯子多態(tài)性檢測中發(fā)現第一外顯子有兩個堿基突變位點(T6213768G、C6213750G)引起氨基酸的改變,且第一外顯子的SNP位點所造成基因型的改變在吐魯番斗雞和新羅曼蛋雞中有顯著不同的優(yōu)勢等位基因和優(yōu)勢基因型。因此,進一步證實SLC6A4基因第一外顯子的多態(tài)性可能與攻擊行為有關,而在NR2E1基因的外顯子多態(tài)性檢測中未發(fā)現與攻擊行為相關的基因多態(tài)性。(3)鏡像打斗試驗中,吐魯番斗公雞的直接攻擊(Fighting)極顯著高于雜交子一代公雞(P0.01);而在非直接攻擊(Non-fighting)上兩者差異不顯著。在配對打斗試驗中,吐魯番斗雞的直接攻擊(Fighting)顯著高于雜交子一代(p0.05),然而二者之間在非直接攻擊(Non-fighting)行為變量上的表現為差異不顯著(P0.05)。(4)通過SLC6A4第一外顯子的基因型與鏡像和配對打斗測得表型的關聯分析發(fā)現具有BB基因型的斗雞與F1代的攻擊性在鏡像打斗試驗中和配對打斗試驗中均顯著高于其它基因型的雞,從而說明第一外顯子的BB基因型與攻擊行為有密切的相關性。結論:通過對攻擊行為強的吐魯番斗雞、攻擊行為弱的新羅曼蛋雞及其雜交F1不同時期SLC6A4基因和NR2E1基因表達檢測發(fā)現SLC6A4基因表達與攻擊行為呈正相關,而NR2E1的基因表達則與攻擊行為呈負相關;進而通過SLC6A4與NR2E1在吐魯番斗雞,新羅曼蛋雞及F1、F2代的SNP多態(tài)性進行分析,在SLC6A4第一外顯子內尋找到了與攻擊行為相關的分子標記;通過吐魯番斗雞與F1代的表型檢測發(fā)現兩者之間在攻擊性方面有顯著的差異,進而通過攻擊行為的表型與SLC6A4第一外顯子的基因型關聯分析發(fā)現BB基因型與攻擊行為具有的相關性,可作為吐魯番斗雞分子輔助標記選擇的參考基因型。
[Abstract]:Objective: To explore the genetic characteristics of the aggressive behavior phenotype and genotype of Turpan cockfighting chicken through the analysis of the phenotype and genotype of the aggressive behavior of Turpan chicken fighting, looking for the molecular markers that can be used as the attack behavior of the Turpan cockfighting, and applying the molecular marker assisted selection to the breeding of the attack behavior of the fighting chicken in Turpan, for the attack line of the fight chicken in Turpan. The basis for molecular breeding was established. Methods: the F1 generation was hybridized with aggressive Turpan fights and aggressive Xinluo man laying hens. Fluorescence quantitative PCR was used to determine the SLC6A4 and NR2E1 genes in aggressive Turpan cocks. The brains of the aggressive Xinluo man egg cock and the F1 generation were different from the shell to sexual maturity. The expression changes at the stage of the period; the blood samples of four types of chickens of the parents, the F1 generation and the three generation of the three generation of the F2 generation were collected through the whole sib mating of the chickens of the F2 generation, and the PCR-SSCP method was used to detect the SNP polymorphism of the SLC6A4 gene related to the attack behavior and all the exons and introns of the NR2E1 gene, and then the "mirror self fighting method" was used. "Paired fight method" measured the parents, the F1 generation of the aggressive behavior phenotype, and then analyzed the correlation between the SLC6A4 gene and the NR2E1 gene and the Turpan cockfight attack by the analysis of the variance between the aggressive behavior phenotype and the attack related genotypes. Results: (1) the expression of SLC6A4 gene expression was found in the 7 periods. The potential was wavy, 0 months, 3 month old, and 6 month old had higher expression. The expression of SLC6A4 was positively correlated with the attack behavior in the three chicken groups. The expression of.NR2E1 gene increased gradually in the 7 period, and the expression amount reached the highest in 6 month old. The expression of the three chicken groups at different time periods was the highest. It was found that the expression of NR2E1 was negatively correlated with the attack behavior, indicating that the SLC6A4 gene and the NR2E1 gene were related to the attack behavior of the Turpan cockfighting, which laid a theoretical basis for the subsequent SLC6A4 and NR2E1 gene polymorphism analysis, aiming at obtaining the molecular markers of the SLC6A4 gene and the NR2E1 base, as the molecular marker of the Turpan fighting chicken. 2. (2) in the exon polymorphism detection of the SLC6A4 gene, it was found that two base mutation sites (T6213768G, C6213750G) in exon of the first exon cause the change of amino acids, and the genotype changes caused by the SNP loci of the first exon have significant different advantages in the Turpan cockfighting and the Xinluo man laying hens. Therefore, it was further confirmed that the polymorphism of the first exon of the SLC6A4 gene may be related to the attack behavior, while the polymorphism of the exons in the NR2E1 gene was not detected in the polymorphism of the attack behavior. (3) in the mirror fighting test, the direct attack of the Turpan cock (Fighting) was significantly higher than the miscellaneous in the mirror fighting test. The two generation Rooster (P0.01) of the jiaozi (P0.01) was not significant in the non direct attack (Non-fighting). In the paired fight test, the direct attack (Fighting) of the Turpan chicken was significantly higher than the hybrids (P0.05), but the difference in the non direct attack (Non-fighting) behavioral variables between the two was not significant (P0.05). (4) through SLC6 The correlation between the genotypes of A4 exons and the genotypes of the exons and the matching of paired fights found that the aggression of the cockfighting and the F1 generation with the BB genotype was significantly higher than that of the other genotypes in the mirror fighting test and the paired fight test, indicating that the BB genotype of the first exon was closely related to the attack behavior. The detection of the SLC6A4 gene and NR2E1 gene expression of the weak Xinluo man laying hens and their hybrid F1 at different stages of the aggressive behavior of Turpan cockfighting was found to have a positive correlation with the attack behavior, while the gene expression of NR2E1 was negatively correlated with the attack behavior, and then the SLC6A4 and NR2E1 in Turpan were new. The SNP polymorphism of the Luo Man layer and the F1, F2 generation was analyzed, and the molecular markers associated with the attack were found in the SLC6A4 exon. The phenotype of the Turpan cockfighting and the F1 generation showed a significant difference between the attack and the phenotype of the attack line and the genotype of the first exon SLC6A4. The association analysis showed that BB genotype was correlated with aggressive behavior and could be used as a reference genotype for molecular marker selection in Turpan cockfighting.
【學位授予單位】：石河子大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：S831

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本文編號：2167241