【摘要】：蘋(píng)果(Malus×domestica Brokh.)是童期長(zhǎng)、基因組高度雜合且自交不親和的果樹(shù)樹(shù)種,通過(guò)常規(guī)育種手段較難獲得純合基因型種質(zhì)。當(dāng)前蘋(píng)果主栽品種屬于雜交嫁接品種,蘊(yùn)含了豐富的優(yōu)良性狀遺傳資源,挖掘新的優(yōu)良純合基因型種質(zhì)親本是加速蘋(píng)果育種進(jìn)程的重要步驟�；ㄋ庪x體培養(yǎng)作為單倍體育種的主要手段,可在短期內(nèi)直接誘導(dǎo)胚狀體形成途徑快速獲得純合基因型新種質(zhì)。這些新種質(zhì)很大程度豐富了蘋(píng)果育種親本種質(zhì)資源,為挖掘蘋(píng)果優(yōu)良性狀基因提供了重要材料,為后期的田間性狀篩選,雜交育種育奠定了堅(jiān)實(shí)基礎(chǔ)。本研究以早熟多抗品種嘎拉(Gala)、富士(Fuji)和丹霞(Danxia)為試驗(yàn)品種,并采集蘋(píng)果單核靠邊期到雙核早期花藥(未開(kāi)放的花蕾)為實(shí)驗(yàn)材料。首先研究了低溫處理花藥對(duì)糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白基因SWEET表達(dá)的影響。經(jīng)在4℃低溫處理10天和30天后,采用定量PCR對(duì)MdSWEET1基因表達(dá)量進(jìn)行檢測(cè)。其次對(duì)蘋(píng)果花藥經(jīng)低溫預(yù)處理30天后進(jìn)行離體培養(yǎng),并選用蘋(píng)果SSR標(biāo)記對(duì)再生植株進(jìn)行基因型鑒定。最后對(duì)再生植株進(jìn)行植物學(xué)觀察。結(jié)果如下:1.蘋(píng)果中MdSWEET1基因編碼一個(gè)含有3個(gè)α-螺旋的跨膜結(jié)構(gòu)蛋白,N端位于膜外。隨低溫預(yù)處理時(shí)間增加MdSWEET1基因表達(dá)顯著下調(diào),下調(diào)的MdSWEET1基因表達(dá)可能影響花粉的發(fā)育分化而轉(zhuǎn)向與胚狀體誘導(dǎo),有利于再生植株的發(fā)生。2.蘋(píng)果花藥經(jīng)低溫預(yù)處理30天后進(jìn)行離體培養(yǎng),共接種“嘎啦”花藥74200個(gè),從未被污染的5萬(wàn)多個(gè)花藥中成功誘導(dǎo)形成386個(gè)胚狀體(胚狀體誘導(dǎo)率0.7%),經(jīng)分化培養(yǎng)獲得64株再生苗(植株再生率16.6%)。經(jīng)過(guò)繼代培養(yǎng),最終獲得30個(gè)成活再生株系。FACS流式細(xì)胞儀倍性分析,其中包括28個(gè)二倍體株系,1個(gè)單倍體株系和1個(gè)四倍體株系。同樣的培養(yǎng)體系,獲得9個(gè)“丹霞”再生株系,7個(gè)“富士”再生株系。3.選用130個(gè)蘋(píng)果HIDRAS數(shù)據(jù)庫(kù)SSR標(biāo)記對(duì)所有植株進(jìn)行PCR擴(kuò)增,經(jīng)過(guò)凝膠電泳(PAGE)檢測(cè)PCR擴(kuò)增產(chǎn)物,PAGE結(jié)果表明:篩選到20個(gè)SSR標(biāo)記(其余標(biāo)記不具有多態(tài)性或帶型雜亂)可鑒定“嘎啦”再生株系均為花粉(小孢子)單倍體細(xì)胞來(lái)源;“丹霞”和“富士”分別篩得16個(gè)SSR標(biāo)記、17個(gè)SSR標(biāo)記以鑒定再生株系來(lái)源于單倍體細(xì)胞。4.蘋(píng)果有17個(gè)連鎖群,每一個(gè)連鎖群對(duì)應(yīng)一個(gè)SSR標(biāo)記,進(jìn)一步從20個(gè)SSR中篩選出17個(gè)SSR標(biāo)記,采用毛細(xì)管電泳進(jìn)行基因型鑒定對(duì)所獲得的30個(gè)“嘎啦”再生株系。結(jié)果表明這組SSR標(biāo)記能有效區(qū)分鑒定不同再生植株基因型。5.繼代培養(yǎng)60 d后的嘎啦再生植株的形態(tài)學(xué)觀察顯示:不同再生株系的株高、葉長(zhǎng)、葉寬等特征差異明顯。不同二倍體純合植株的植物學(xué)特征也存在差異:Gala05植株相對(duì)較高,葉基變寬,葉尖漸尖;Gala07葉片變小、變厚,葉柄變短且基部寬大,葉色深且有很強(qiáng)的光澤度;Gala18葉片較小,葉數(shù)較多。純合二倍體再生植株長(zhǎng)勢(shì)弱于Gala雜合供體,但強(qiáng)于單倍體和純合四倍體的趨勢(shì)。本研究結(jié)果證明,單倍體花藥離體培養(yǎng)是創(chuàng)制蘋(píng)果新種質(zhì)的有效手段。獲得的純合體材料對(duì)后期的田間雜交,蘋(píng)果新品種選育有著重要的意義。
[Abstract]:Apples ( malmquat Brokh . ) This paper studied the effect of low temperature treatment on the expression of MdSWEET1 gene . The results were as follows : 1 . After 30 days of low temperature treatment , the expression of MdSWEET1 gene was detected . There were 16 SSR markers , 17 SSR markers , 17 SSR markers , 17 SSR markers in each linkage group , 17 SSR markers in each linkage group .
【學(xué)位授予單位】：山西大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類(lèi)號(hào)】：S661.1

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2135278