發(fā)布時間：2018-07-18 15:17

【摘要】：SOC1基因是開花時間調(diào)控基因,AG基因是控制高等植物花器官發(fā)育基因,這兩個基因在花發(fā)育過程中起著重要的調(diào)控作用。本研究對水曲柳SOC1和AG基因編碼區(qū)進行了克隆,分別命名為FmSOC1和FmAG。并成功構(gòu)建了植物表達載體pROK Ⅱ-35S::FmSOC1和 pCAMBIA1301-35S::FmAG,通過根癌農(nóng)桿菌介導(dǎo)的遺傳轉(zhuǎn)化技術(shù),成功轉(zhuǎn)入煙草中,獲得了轉(zhuǎn)FmSOC1口FmAG煙草T0植株。主要結(jié)果如下：1、FmSOC1和FmAG基因編碼區(qū)全長的克隆及生物信息學分析本研究獲得了FmSOC1和FmAG基因全長序列,FmSOC1基因編碼區(qū)全長為654bp,與水曲柳轉(zhuǎn)錄組中SOCl序列核苷酸一致性為93%,預(yù)測編碼氨基酸長度為218aa,編碼蛋白的分子量為24920.43,等電點pI為9.40,不穩(wěn)定系數(shù)為61.33,是不穩(wěn)定蛋白,亞細胞定位分析顯示FmSOC1基因在細胞核、葉綠體和線粒體中均表達,聚類分析顯示FmSOC1蛋白與芝麻、寬葉車前和金魚草中SOC1同源蛋白親緣關(guān)系最近；FmAG基因編碼區(qū)全長為726bp,與水曲柳轉(zhuǎn)錄組中AG序列核苷酸一致性為98%,預(yù)測的氨基酸長度為242aa,編碼蛋白的分子量為27913.51,等電點pI為9.25,不穩(wěn)定系數(shù)為67.48,是不穩(wěn)定蛋白,亞細胞定位分析顯示FmAG基因在細胞核中,聚類分析顯示FmAG蛋白與美國紅h�、晋嶃产L橢ヂ櫓蠥G同源蛋白親緣關(guān)系最近。2、植物表達載體pROK Ⅱ-35S::FmSOC1和pCAMBIA1301-35S::FmA G的構(gòu)建及遺傳轉(zhuǎn)化體系的優(yōu)化構(gòu)建了Xba Ⅰ/Sac Ⅰ雙酶切pROK Ⅱ-35S:.FmSOCl和Nco Ⅰ單酶切pCAMBIA1301-35S:: FmAG植物表達載體,轉(zhuǎn)入根癌農(nóng)桿菌LBA4404中,本研究優(yōu)化了農(nóng)桿菌介導(dǎo)的煙草遺傳轉(zhuǎn)化體系,結(jié)果為：外植體經(jīng)預(yù)培養(yǎng)2d,用OD_(600)值0.8的農(nóng)桿菌LBA4404轉(zhuǎn)入植物表達載體pROK Ⅱ-35S::FmSOCl 和 pCAMBIA1301-35S::FmAG菌液浸染25min,再共培養(yǎng)3d,有利于提高遺傳轉(zhuǎn)化效率。不定芽篩選中,卡那霉素和潮霉素濃度分別為50mg/L和2Omg/L時適于農(nóng)桿菌侵染后的脫菌和抑菌操作。3、轉(zhuǎn)基因煙草遺傳轉(zhuǎn)化及分子鑒定PCR和PCR-Southern雜交檢測轉(zhuǎn)基因煙草To代植株,初步證實外源FmSOC1基因整合到了煙草的基因組中,轉(zhuǎn)化率為31.58%。隨機選取經(jīng)PCR檢測為陽性的煙草苗5株進行RT-PCR分析,發(fā)現(xiàn)有3株SOC1基因檢測到基因轉(zhuǎn)錄,從形態(tài)學上觀察發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)SOC1基因的煙草比野生型煙草提前開花。
[Abstract]:SOC1 gene is the flowering control gene AG gene is the control of higher plant floral organ development genes these two genes play an important role in the flower development process. In this study, the coding region of SOC1 and AG of Fraxinus mandshurica was cloned and named FmSOC1 and FmAG, respectively. The plant expression vectors pROK 鈪，

本文編號：2132313