發(fā)布時間：2018-07-05 07:14

  本文選題：山岡單胞菌 + 幾丁質(zhì)酶　； 參考：《核農(nóng)學(xué)報(bào)》2017年11期

【摘要】：分離自西藏色季拉山海拔4 530 m高山草甸土壤的山岡單胞菌(Collimonas pratensis)ZL261具有很高的幾丁質(zhì)酶活性,為了明確其幾丁質(zhì)酶種類及作用特點(diǎn),依據(jù)已報(bào)道的食真菌山岡單胞菌(Collimonas fungivorans)Ter331胞外內(nèi)切幾丁質(zhì)酶基因chiI相關(guān)序列設(shè)計(jì)引物,利用分段擴(kuò)增的方法得到了菌株ZL261幾丁質(zhì)酶基因,并對其序列和編碼蛋白的氨基酸進(jìn)行分析。結(jié)果表明,全長1 338 bp的chiIQ基因編碼的幾丁質(zhì)酶ChiIQ由445個氨基酸組成,分子量為46.04 kDa,等電點(diǎn)為5.67。序列比對和同源性分析發(fā)現(xiàn),該基因與食真菌山岡單胞菌Ter331幾丁質(zhì)酶基因chiI序列相似性最高(92%),其氨基酸序列含有幾丁質(zhì)酶GH18家族高度保守序列SXGG和GXDXDXE,因此,ChiIQ屬GH18家族。利用雙酶切法構(gòu)建了ZL261幾丁質(zhì)酶基因原核表達(dá)載體,并在大腸桿菌BL21中成功誘導(dǎo)表達(dá)。本試驗(yàn)結(jié)果為后期研究幾丁質(zhì)酶在山岡單胞菌生防應(yīng)用中的功能以及生防菌ZL261的開發(fā)和應(yīng)用奠定了基礎(chǔ)。
[Abstract]:Collimonas pratensis ZL261 isolated from the alpine meadow soil of Serjila Mountain, Tibet, has high chitinase activity. Based on the reported sequence of chitinase gene of Collimonas fungivorans Ter331, primers were designed. Strain ZL261 chitinase gene was obtained by segmental amplification, and its sequence and amino acid encoding protein were analyzed. The results showed that chiIQ gene encoding chitinase ChiIQ was composed of 445 amino acids with molecular weight of 46.04 kDa and isoelectric point of 5.67. Sequence alignment and homology analysis showed that this gene had the highest similarity (92%) with the chiI sequence of Ter331 chitinase gene of fungi Ter331. Its amino acid sequence contained highly conserved sequences of chitinase GH18 family SXGG and GXDXDXE, so ChiIQ belongs to GH18 family. The prokaryotic expression vector of ZL261 chitinase gene was constructed by double enzyme digestion and successfully induced in Escherichia coli BL21. The results laid a foundation for studying the function of chitinase in biocontrol and the development and application of biocontrol bacteria ZL261.
【作者單位】： 北京市農(nóng)林科學(xué)院植物保護(hù)環(huán)境保護(hù)研究所;廣東海洋大學(xué)農(nóng)學(xué)院;
【基金】：北京市科技計(jì)劃課題(D151100003915003) 北京市優(yōu)秀人才青年骨干個人項(xiàng)目(2014000020060G180) 北京市農(nóng)林科學(xué)院科技創(chuàng)新能力建設(shè)專項(xiàng)(KJCX20170410)
【分類號】：Q78;Q93

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本文編號：2099431