本文選題：甾醇降解 + -雄烯二酮�。� 參考：《武漢大學(xué)學(xué)報(bào)(理學(xué)版)》2017年01期

【摘要】：工業(yè)上用于生產(chǎn)4-雄烯-4-醇-3,17-二酮(4-雄烯二酮,4-AD)的小金色分枝桿菌(Mycobacterium neoaurum)在降解植物甾醇側(cè)鏈的過程中同時(shí)產(chǎn)生部分1,4-雄烯-4-醇-3,17-二酮(1,4-雄烯二酮,ADD),而3-甾酮-Δ1-脫氫酶KstD催化了4-AD到ADD的轉(zhuǎn)化.克隆該工業(yè)菌株的kstD基因測序后發(fā)現(xiàn),其與報(bào)道的標(biāo)準(zhǔn)分枝桿菌基因組中的kstD基因相比有3個(gè)氨基酸的突變(A6E,S138L,A193V).這些突變使得KstD的酶活受到影響,一定程度上阻礙4-AD向ADD的轉(zhuǎn)變.為了實(shí)現(xiàn)從植物甾醇降解中選擇性地得到4-AD或ADD,通過敲除kstD基因,阻斷4-AD到ADD的轉(zhuǎn)化,獲得一株只產(chǎn)4-AD的突變菌株,代謝產(chǎn)物中4-AD達(dá)79.3%.通過修復(fù)kstD酶的氨基酸位點(diǎn),使之恢復(fù)到文獻(xiàn)報(bào)道的正常序列,并在敲除kstD基因菌株中,將修復(fù)后的kstD基因安置在強(qiáng)啟動子pG13下,重新導(dǎo)回到突變菌株中進(jìn)行回補(bǔ)強(qiáng)化表達(dá),獲得一株可以大量產(chǎn)生ADD的菌株.野生型分枝桿菌轉(zhuǎn)化植物甾醇產(chǎn)生的產(chǎn)物中,ADD僅占27.0%,經(jīng)回補(bǔ)強(qiáng)化表達(dá)后的基因工程菌株轉(zhuǎn)化植物甾醇產(chǎn)生的產(chǎn)物中ADD占63.0%.結(jié)果表明,通過敲除或者在突變體菌株中過表達(dá)正常的kstD基因可以使該工業(yè)菌株選擇性地優(yōu)產(chǎn)4-AD或ADD.
[Abstract]:Mycobacterium neoaurum, which is used to produce 4-androgen-4-androstene-17-diketone (4-AD), produces a part of 1O4-androgen-4-ol -317-dione (14-androstenedione add) and 3- sterone-螖 1- desorption while degrading the side chain of phytosterol. KstD catalyzes the conversion of 4-AD to add. After cloning the kstD gene of the industrial strain, it was found that there were three amino acid mutations (A6EN S138LN A193V) between the kstD gene and the reported kstD gene in the standard mycobacterium genome. These mutations affected the enzyme activity of KstD and hindered the conversion of 4-AD to add to some extent. In order to obtain 4-AD or ADD selectively from phytosterol degradation, a mutant strain producing 4-AD was obtained by knockout the kstD gene and blocking the transformation from 4-AD to add. The metabolic product of 4-AD reached 79.3%. By repairing the amino acid site of kstD enzyme, the kstD gene was restored to the normal sequence reported in the literature, and the kstD gene was inserted in the kstD gene knockout strain under the strong promoter pG13. A strain that can produce add in large quantities was obtained. Only 27.0% of the products from phytosterol transformed by wild type Mycobacterium spp., and 63.0% of the product from phytosterol transformed by genetically engineered strain after supplementation and enhanced expression. The results showed that the industrial strain could selectively produce 4-AD or ADD by knockout or overexpression of the normal kstD gene in the mutant strain.
【作者單位】： 武漢大學(xué)藥學(xué)院;
【基金】：國家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(210700039)
【分類號】：Q78

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前5條

1 黃麗君;張洪斌;胡雪芹;;誘變選育雄烯二酮高產(chǎn)菌株及其發(fā)酵條件研究[J];生物學(xué)雜志;2013年04期

2 張豐松;胡海平;黃澤春;王代懿;王琪;岳波;劉鋒;;雄烯二酮在我國典型土壤中的吸附特性[J];生態(tài)毒理學(xué)報(bào);2014年01期

3 王建;;分枝桿菌BD696-6固定化發(fā)酵產(chǎn)雄烯二酮的研究[J];科技致富向?qū)?2012年11期

4 趙麗萍;張會彥;張先舟;魏昭;李海波;張偉;;分枝桿菌Mycobacterium ZLP生產(chǎn)雄烯二酮(4-AD)的優(yōu)化工藝[J];生物加工過程;2008年06期

5 ;[J];;年期

相關(guān)會議論文 前4條

1 楊英;姜紹通;;分枝桿菌降解植物甾醇制備雄烯二酮機(jī)理[A];中國機(jī)械工程學(xué)會包裝與食品工程分會2010年學(xué)術(shù)年會論文集[C];2010年

2 楊英;姜紹通;趙俊平;胡錦艷;;生物降解植物甾醇制備雄烯二酮工藝研究[A];現(xiàn)代農(nóng)業(yè)理論與實(shí)踐——安徽現(xiàn)代農(nóng)業(yè)博士科技論壇論文集[C];2007年

3 王靜竹;吳侔天;張亦農(nóng);劉欣;楊志勇;;同位素質(zhì)譜法檢測尿中雄烯二酮代謝物[A];中國質(zhì)譜學(xué)會第七屆會員代表大會暨學(xué)術(shù)報(bào)告會論文集[C];2004年

4 周常文;馬紀(jì)萱;高遠(yuǎn);邁迪娜;呂兆啟;;抗雄烯二酮獨(dú)特型抗體的制備及其性質(zhì)[A];中國細(xì)胞生物學(xué)學(xué)會第五次會議論文摘要匯編[C];1992年

相關(guān)重要報(bào)紙文章 前4條

1 記者 王艷華;我市年產(chǎn)1000噸雄烯二酮項(xiàng)目列入國家戰(zhàn)略性新興產(chǎn)業(yè)項(xiàng)目[N];菏澤日報(bào);2011年

2 董耿;雄烯二酮引起健康危害[N];中國醫(yī)藥報(bào);2004年

3 胡曉偉邋龐曉敏;天藥自主創(chuàng)新主導(dǎo)原料市場[N];天津日報(bào);2008年

4 記者 柳悅　宮璐璐;生物提取藥用“黃金”[N];天津日報(bào);2009年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前2條

1 陳韶蕊;7位含氧/含氮甾體芳香酶抑制劑的合成研究[D];天津大學(xué);2010年

2 馮書曉;雄烯二酮C17位引入特定側(cè)鏈合成甾體藥物的研究[D];鄭州大學(xué);2015年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前9條

1 羅炳華;外加因子對兩相系統(tǒng)轉(zhuǎn)化植物甾醇制備雄烯二酮的影響[D];合肥工業(yè)大學(xué);2009年

2 趙俊平;兩相系統(tǒng)發(fā)酵轉(zhuǎn)化植物甾醇為雄烯二酮的研究[D];合肥工業(yè)大學(xué);2007年

3 羅金峰;7位接枝修飾的甾體芳香酶抑制劑的合成研究[D];天津大學(xué);2007年

4 黃麗君;雄烯二酮產(chǎn)生菌的誘變選育及發(fā)酵條件優(yōu)化的研究[D];合肥工業(yè)大學(xué);2013年

5 馮麗樺;分枝桿菌BD696-6固定化發(fā)酵產(chǎn)雄烯二酮的研究[D];合肥工業(yè)大學(xué);2009年

6 趙麗萍;分枝桿菌降解植物甾醇生產(chǎn)雄烯二酮的發(fā)酵研究[D];河北農(nóng)業(yè)大學(xué);2008年

7 葉景泉;非那雄胺的合成[D];武漢大學(xué);2005年

8 孫婉菊;雄烯二酮耐底物突變株選育及轉(zhuǎn)化條件的優(yōu)化[D];江西師范大學(xué);2014年

9 熊思周;微生物轉(zhuǎn)化植物甾醇藥物中間體培養(yǎng)液的綜合利用[D];武漢輕工大學(xué);2014年

，

本文編號：2064624