本文選題：MiR-b + A　； 參考：《中國(guó)肺癌雜志》2017年06期

【摘要】：背景與目的已有研究表明miR-133b可抑制肺癌細(xì)胞生長(zhǎng),miR-133b表達(dá)水平在肺癌組織及患者血清中顯著降低,miR-133b通過靶向丙酮酸激酶M2型(pyruvate kinase isozyme type M2,PKM2)基因提高鱗癌細(xì)胞的放療敏感性,但其機(jī)制尚未明了。本研究通過提取非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞株A549的CD133~+/CD34~+干細(xì)胞,研究miR-133b對(duì)其增殖及順鉑類藥物(cisplatin,DDP)敏感性的影響,探討miR-133b與PKM2基因的關(guān)系,以及它們?cè)诜伟└杉?xì)胞中的作用。方法使用miRBase和miRNAMap數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行miR-133b與PKM2基因的序列比對(duì)。應(yīng)用免疫磁珠分選法從A549細(xì)胞中分選出CD133~+/CD34~+肺癌干細(xì)胞,流式細(xì)胞儀檢測(cè)純度。轉(zhuǎn)染miR-133b進(jìn)入CD133~+/CD34~+細(xì)胞,qRT-PCR檢測(cè)驗(yàn)證miR-133b表達(dá)情況,CCK8法檢測(cè)細(xì)胞增殖情況;15μg/mL DDP處理轉(zhuǎn)染miR-133b細(xì)胞,檢測(cè)0 h、12 h、24 h、72 h的細(xì)胞凋亡情況;采用Western blot檢測(cè)PKM2蛋白水平的表達(dá)。結(jié)果PKM2基因可能為miR-133b的靶基因;流式結(jié)果顯示CD133~+/CD34~+細(xì)胞的純度為(92.15+4.27)%。qRT-PCR結(jié)果顯示,與對(duì)照組相比,過表達(dá)miR-133b后,miR-133b明顯上調(diào),miR-133b抑制表達(dá)后,miR-133b明顯下調(diào)(P0.05)。細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)及Western blot結(jié)果顯示,與對(duì)照組相比,miR-133b mimics組細(xì)胞的增殖能力顯著降低(P0.05),PKM2蛋白水平明顯降低(P0.05);而抑制miR-133b表達(dá)則明顯增加細(xì)胞的增殖能力及PKM2蛋白水平(P0.05)。DDP處理12 h后miR-133b mimics組細(xì)胞的凋亡持續(xù)明顯高于對(duì)照組(P0.05)。miR-133b mimics+DDP組PKM2蛋白的表達(dá)明顯低于對(duì)照組及miR-133b inhibitor組(P0.05)。結(jié)論過表達(dá)miR-133b能夠通過下調(diào)PKM2而抑制肺癌干細(xì)胞的生長(zhǎng)和增殖,并且可以增強(qiáng)肺癌干細(xì)胞對(duì)DDP的敏感性。
[Abstract]:Background & AIM previous studies have shown that miR-133b inhibits the expression of miR-133b in lung cancer cells and serum of patients with lung cancer. MiR-133b significantly reduces the radiosensitivity of squamous cell carcinoma cells to radiotherapy by targeting pyruvate kinase M2 (pyruvate kinase isozyme type M2PKM2) gene. But its mechanism is not clear. The aim of this study was to investigate the effects of miR-133b on the proliferation and sensitivity of cisplatin (cisplatin DDP) to non-small cell lung cancer cell line A549. The relationship between miR-133b and PKM2 gene and the role of miR-133b in lung cancer stem cells were investigated. Methods miR-133b and PKM2 gene were sequenced using miRBase and miRNAMap database. CD133 ~ / CD34 ~ lung cancer stem cells were isolated from A549 cells by immunomagnetic bead sorting. The purity of CD133 ~ / CD34 ~ lung cancer stem cells was detected by flow cytometry. The expression of miR-133b in the transfected miR-133b cells was detected by RT-PCR. The proliferation of miR-133b cells was detected by CCK8 method, and the apoptosis of miR-133b cells was detected at 12 h and 24 h and 72 h after transfection by CCK8. The expression of PKM2 protein was detected by Western blot. Results PKM2 gene may be the target gene of miR-133b, flow cytometry showed that the purity of CD133- / CD34~ cells was (92.154.27). QRT-PCR showed that miR-133b overexpressed miR-133b up-regulated miR-133b expression and miR-133b down-regulated (P0.05). The results of cell proliferation assay and Western blot showed that, Compared with the control group, the proliferative ability of mimics group was significantly lower (P0.05), the protein level of PKM2 was significantly decreased (P0.05), while the inhibition of miR-133b expression significantly increased the proliferation ability of cells and the cell apoptosis of miR-133b mimics group treated with miR-133b for 12 h (P0.05). The expression of PKM2 protein in mimics DDP group was significantly lower than that in control group and miR-133b inhibitor group (P0.05). Conclusion overexpression of miR-133b can inhibit the growth and proliferation of lung cancer stem cells by down-regulating PKM2 and enhance the sensitivity of lung cancer stem cells to DDP.
【作者單位】： 重慶醫(yī)科大學(xué)附屬醫(yī)院永川醫(yī)院檢驗(yàn)科;成都市新都區(qū)人民醫(yī)院呼吸內(nèi)科;
【分類號(hào)】：R734.2

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本文編號(hào)：2051440