本文選題：無(wú)乳鏈球菌 + sip基因��； 參考：《中國(guó)獸醫(yī)學(xué)報(bào)》2017年07期

【摘要】：為獲得具有無(wú)乳鏈球菌膜表面相關(guān)蛋白sip和磷酸甘油激酶pgk及纖連蛋白FbsA三重活性的多亞單位融合蛋白,研究其作為無(wú)乳鏈球菌亞單位疫苗候選抗原的可行性,根據(jù)GenBank中已發(fā)表的無(wú)乳鏈球菌sip、pgk及FbsA基因的核苷酸序列,利用DNAStar軟件對(duì)蛋白的抗原表位序列進(jìn)行分析并設(shè)計(jì)合成包括重疊PCR引物共4對(duì)引物,通過(guò)重疊PCR技術(shù)將前2個(gè)基因主要抗原區(qū)域進(jìn)行拼接后插入pET30a(+)載體,再將第3個(gè)基因插入。為減少三重基因串聯(lián)表達(dá)過(guò)程中3個(gè)蛋白之間空間構(gòu)象的干擾,在3個(gè)基因連接處各引入1段45bp的柔性linker,結(jié)果重組基因在BL21感受態(tài)中實(shí)現(xiàn)了可溶性表達(dá),表達(dá)的蛋白約62 000;Western blot試驗(yàn)表明多亞單位融合蛋白可被無(wú)乳鏈球菌多抗識(shí)別,且由此融合蛋白制備小鼠多抗能夠識(shí)別sip、pgk及FbsA等3個(gè)蛋白;這表明構(gòu)建的多亞單位融合蛋白可能具備sip、pgk及FbsA蛋白的三重活性,而且在小鼠的攻毒保護(hù)性試驗(yàn)中,重組多亞單位融合抗原對(duì)攻毒小鼠的保護(hù)優(yōu)于單個(gè)蛋白。本試驗(yàn)為牛無(wú)乳鏈球菌性乳腺炎新型疫苗的研究提供了一定的參考數(shù)據(jù)。
[Abstract]:To obtain multiple subunit fusion proteins with triple activity of streptococcus lactococcus membrane associated protein (sip), phosphoglycerin kinase (pgk) and fibronectin FbsA (FbsA), the feasibility of using them as candidate antigens of streptococcus lactococcus vaccine was studied. According to the nucleotide sequences of Sippgk and FbsA genes of Streptococcus lactis reported in GenBank, the antigen epitopes of the protein were analyzed by DNA Star software and 4 pairs of primers including overlapping PCR primers were designed and synthesized. The first two major antigen regions were spliced and inserted into pET30a () vector by overlapping PCR technique, and the third gene was inserted into pET30a () vector. In order to reduce the interference of spatial conformation between the three proteins in the process of triple gene tandem expression, the flexible linker of 45bp was introduced into each of the three gene junctions, and the recombinant gene was expressed soluble in BL21 receptive state. Western blot analysis showed that the fusion protein could be recognized by streptococcus lactobacillus polyantibodies, and the fusion protein could recognize three proteins such as sip pgk and FbsA. These results suggested that the constructed fusion protein may have triple activity of sip pgk and FbsA proteins, and the recombinant polysubunit fusion antigen was superior to a single protein in protecting mice against toxin attack. This study provides some reference data for the study of new vaccine of bovine streptococcal mastitis.
【作者單位】： 內(nèi)蒙古民族大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院;內(nèi)蒙古民族大學(xué)乳源性致病菌研究所;山東省濱州市畜牧獸醫(yī)研究所;
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(31060352,31260600) 內(nèi)蒙古民族大學(xué)與通遼市政府合作資助項(xiàng)目(SXYB2012086)
【分類號(hào)】：S858.23

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前1條

1 王建玲;樊欣迎;包樂(lè)媛;杜連祥;;融合基因EGFRi-IL-24真核表達(dá)載體的構(gòu)建與表達(dá)[J];生物醫(yī)學(xué)工程學(xué)雜志;2010年02期

【共引文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前2條

1 吳金花;布日額;王金良;陳金龍;錫林高娃;孫立杰;王華;杜長(zhǎng)智;白文麗;;奶牛乳腺炎無(wú)乳鏈球菌sip、pgk及FbsA基因主要抗原區(qū)域的融合表達(dá)及抗原性鑒定[J];中國(guó)獸醫(yī)學(xué)報(bào);2017年07期

2 曾祖聰;曹建萌;盧邁新;可小麗;劉志剛;高風(fēng)英;朱華平;;羅非魚(yú)無(wú)乳鏈球菌LrrG-Sip融合基因原核表達(dá)載體的構(gòu)建及表達(dá)[J];南方水產(chǎn)科學(xué);2014年05期

【二級(jí)參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前2條

1 黃巖山,董勇,李輝,王同映,裘霽宛,余應(yīng)年;畢赤酵母表達(dá)重組人白細(xì)胞介素11的純化與鑒定[J];生物工程學(xué)報(bào);2001年03期

2 王曉鳴,金奇,李玉英,張智清,趙明,侯云德;帶有EGF受體干擾序列的γ干擾素新分子抗腫瘤細(xì)胞增殖活性的提高[J];中國(guó)科學(xué)(B輯 化學(xué) 生命科學(xué) 地學(xué));1991年03期

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 楊建德;劉燕霏;;耐氨芐西林牛無(wú)乳鏈球菌的分離、鑒定與耐藥性分析[J];黑龍江畜牧獸醫(yī);2011年15期

2 李宏勝;郁杰;羅金印;李新圃;徐繼英;王旭榮;張禮華;;牛源性無(wú)乳鏈球菌血清型分布及抗生素耐藥性研究[J];中國(guó)畜牧獸醫(yī);2012年01期

3 楊峰;王旭榮;李新圃;羅金印;王玲;李宏勝;;N-乙酰-L-半胱氨酸對(duì)Ⅰa型牛源無(wú)乳鏈球菌誘導(dǎo)的小鼠肝臟氧化損傷的保護(hù)作用[J];中國(guó)畜牧獸醫(yī);2013年08期

4 E.F.Logan;霍鳳秀;;牛乳房實(shí)驗(yàn)性感染無(wú)乳鏈球菌時(shí)各種免疫球蛋白的分布[J];國(guó)外獸醫(yī)學(xué).畜禽疾病;1987年04期

5 常瑞祥;王旭榮;楊志強(qiáng);李建喜;;無(wú)乳鏈球菌黏附因子研究進(jìn)展[J];動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展;2014年02期

6 褚明亮;陳創(chuàng)夫;劉君;魏風(fēng);胡圣偉;;奶牛無(wú)乳鏈球菌疫苗的研究進(jìn)展[J];飼料工業(yè);2008年01期

7 楊有武;;青海地區(qū)奶牛無(wú)乳鏈球菌的分離與鑒定[J];中國(guó)畜牧獸醫(yī);2012年02期

8 陳賀;吳灶和;王蓓;黃郁蔥;魯義善;簡(jiǎn)紀(jì)常;;羅非魚(yú)源無(wú)乳鏈球菌培養(yǎng)基及培養(yǎng)條件的優(yōu)化[J];廣東海洋大學(xué)學(xué)報(bào);2012年03期

9 E.F.LOGAN;田連信;;牛感染無(wú)乳鏈球菌的抗體分布[J];中國(guó)獸藥雜志;1988年04期

10 祝t熈，

本文編號(hào)：2029317