馬藺重金屬ATP酶基因HMA 2的RNAi載體構(gòu)建及其遺傳轉(zhuǎn)化
發(fā)布時(shí)間:2018-06-17 02:10
本文選題:馬藺 + 重金屬ATPase酶。 參考:《草業(yè)科學(xué)》2017年05期
【摘要】:重金屬ATP酶基因HMA2介導(dǎo)的Cd長距離運(yùn)輸對植物體內(nèi)Cd的分配及解毒起重要作用。然而,有關(guān)馬藺(Iris lactea)體內(nèi)Cd長距離運(yùn)輸?shù)姆肿訖C(jī)制仍不清楚。本研究以馬藺根中總RNA為模板,采用RT-PCR方法獲得了重金屬ATP酶基因片段,以中間載體pHANNIBAL和植物表達(dá)載體pART27為基礎(chǔ),采用酶切和連接的方法,構(gòu)建了CaMV35S啟動子驅(qū)動的含有IlHMA2基因片段反向重復(fù)序列的RNAi植物表達(dá)載體pARTG1G2,用凍融法將此重組質(zhì)粒導(dǎo)入農(nóng)桿菌GV3101,并轉(zhuǎn)入到馬藺幼苗體內(nèi)獲得了IlHMA2-RNAi轉(zhuǎn)化株系。這將為闡明IlHMA2介導(dǎo)的Cd長距離運(yùn)輸在馬藺適應(yīng)重金屬鎘污染環(huán)境中的作用機(jī)制奠定基礎(chǔ)。
[Abstract]:The long distance transport of CD mediated by heavy metal ATPase gene HMA2 plays an important role in CD distribution and detoxification in plants. However, the molecular mechanism of CD transport in Iris lactea remains unclear. In this study, heavy metal ATPase gene fragments were obtained by RT-PCR from total RNA in iris root. Based on the intermediate vector pH ANNIBAL and plant expression vector pART27, enzyme digestion and ligation were used. The RNAi plant expression vector pARTG1G2 driven by CaMV35S promoter containing the reverse repeat sequence of IlHMA2 gene fragment was constructed. The recombinant plasmid was introduced into Agrobacterium tumefaciens GV3101 by freeze-thaw method. This will lay a foundation for elucidating the mechanism of long distance transport of CD mediated by IlHMA2 in the adaptation of Iris marina to the environment polluted by heavy metal cadmium.
【作者單位】: 山西農(nóng)業(yè)大學(xué)林學(xué)院;北京市農(nóng)林科學(xué)院北京草業(yè)與環(huán)境研究發(fā)展中心;
【基金】:北京市自然科學(xué)基金(6152008) 北京市農(nóng)林科學(xué)院科技創(chuàng)新能力建設(shè)專項(xiàng)(KJCX20140103、KJCX20170110)
【分類號】:S688.4
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,本文編號:2029138
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