發(fā)布時間：2018-06-13 00:46

  本文選題：遼寧絨山羊 + IGF2基因��； 參考：《沈陽農(nóng)業(yè)大學(xué)》2017年碩士論文

【摘要】：遼寧絨山羊是我國特有的絨肉兼用型山羊。本研究以遼寧絨山羊為研究對象,利用分子生物學(xué)技術(shù),克隆IGF2基因和ZBED6基因進(jìn)行序列測定,分析基因的5'調(diào)控區(qū)、編碼區(qū)。借助生物信息學(xué)分析軟件,將遼寧絨山羊IGF2基因和ZBED6基因序列與其他物種基因序列進(jìn)行比對,并預(yù)測其CpG島。本研究分析啟動子的甲基化水平對基因表達(dá)的影響;推測編碼蛋白質(zhì)的二、三級結(jié)構(gòu)和理化性質(zhì)及在不同組織中的表達(dá)譜;為遼寧絨山羊的分子育種研究奠定理論基礎(chǔ)。主要研究如下:1.IGF2和ZBED6的基因克隆與分子特征分析對遼寧絨山羊的IGF2和ZBED6基因的5'調(diào)控區(qū)和編碼區(qū)進(jìn)行特異性擴(kuò)增,并進(jìn)行克隆和測序,研究發(fā)現(xiàn)克隆出的IGF2基因序列總長度為2090bp,編碼區(qū)長度為540bp,編碼179個氨基酸,在5'調(diào)控區(qū)第263bp處發(fā)生A/T突變,第974bp處發(fā)生A堿基缺失突變,該蛋白中存在信號肽序列,為分泌性蛋白質(zhì),有較強(qiáng)的親水性但不穩(wěn)定�？寺〕龅腪BED6基因序列總長度為4851,編碼區(qū)長度為2943bp,編碼980個氨基酸,編碼區(qū)中第838bp處發(fā)生A/G突變;第944bp處發(fā)生A/G突變;第1799bp處發(fā)生C/T突變;2276bp處發(fā)生A/G突變;2323bp處發(fā)生C/T突變;2333bp處發(fā)生G/T突變;2397bp處發(fā)生A/G突變;2480bp處發(fā)生A/G突變,該蛋白質(zhì)中未發(fā)現(xiàn)明顯的信號肽序列,親水性較強(qiáng)且不穩(wěn)定。2.IGF2和ZBED6的表達(dá)水平的研究對遼寧絨山羊的肌肉、心、肝、脾、肺、腎、睪丸七中不同的組織中的IGF2和ZBED6的相對表達(dá)量進(jìn)行研究,發(fā)現(xiàn)在肌肉組織中ZBED6的表達(dá)量最高,IGF2的表達(dá)量相對較低;IGF2基因表達(dá)量結(jié)果是:肝臟心臟腎臟肌肉肺臟睪丸脾臟,ZBED6基因表達(dá)量結(jié)果是:肌肉心臟肝臟腎臟睪丸肺臟脾臟。3.IGF2和ZBED6啟動子甲基化水平的研究對遼寧絨山羊肌肉組織中的啟動子區(qū)進(jìn)行預(yù)測,發(fā)現(xiàn)在IGF2基因啟動子區(qū)有34個CpG位點,ZBED6基因啟動子區(qū)有28個CpG位點,通過亞硫酸氫鹽測序(BSP)檢測發(fā)現(xiàn),肌肉組織中的IGF2甲基化水平明顯高于ZBED6的甲基化水平,結(jié)合IGF2和ZBED6的表達(dá)譜進(jìn)行分析發(fā)現(xiàn),在肌肉組織中IGF2的表達(dá)量不僅受到抑制因子ZBED6的調(diào)控,還受到啟動子區(qū)的甲基化水平的影響,基因的甲基化水平越高其相對表達(dá)量越低。以上研究結(jié)果顯示,在遼寧絨山羊的肌肉生長發(fā)育的過程中,IGF2和ZBED6基因?qū)ζ溆兄匾恼{(diào)控作用,IGF2編碼179個氨基酸,ZBED6編碼980個氨基酸。IGF2和ZBED6在不同組織中存在差異性表達(dá)和DNA甲基化修飾,這些差異基因?qū)∪饧?xì)胞的生長分化以及代謝有重要的關(guān)系。本研究從分子水平對遼寧絨山羊肌肉生長發(fā)育進(jìn)行研究,為遼寧絨山羊的育種工作提供理論依據(jù)。
[Abstract]:Liaoning cashmere goats are the unique cashmere goats in China. This study takes Liaoning cashmere goats as the research object, using molecular biology technology, cloning IGF2 gene and ZBED6 gene for sequencing, analyzing the 5'regulatory region and coding region of the gene. With the help of bioinformatics analysis software, the IGF2 and ZBED6 gene sequences of Liaoning cashmere goats are sequenced. The comparison of the gene sequences of other species and the prediction of its CpG island. This study analyzed the effect of the promoter methylation level on the gene expression, speculates the two, three level structure and physicochemical properties of the encoded protein and the expression profiles in different tissues; it lays a theoretical foundation for the molecular breeding of Liaoning cashmere goats. The main studies are as follows: 1.IGF2 and Z BED6 gene cloning and molecular characterization analysis of the IGF2 and ZBED6 gene of Liaoning cashmere goats was specifically amplified and cloned and sequenced. The total length of the IGF2 gene sequence was 2090bp, the length of the coding region was 540bp, 179 amino acids were encoded, and A/T mutations were occurring at 263bp at 5'regulation area. There is a deletion mutation of A base in 974bp, which contains a sequence of signal peptide, which is a secretory protein with strong hydrophilic but unstable. The total length of the ZBED6 gene sequence is 4851, the length of the coding region is 2943bp, the encoding of 980 amino acids, the A/G mutation at 838bp in the coding region, A/G mutation at 944bp, and 1799bp. C/T mutation, A/G mutation at 2276bp, C/T mutation at 2323bp, G/T mutation at 2333bp, A/G mutation at 2397bp, A/G mutation at 2397bp, and no apparent sequence of signal peptides in 2480bp, and the study on the muscle, heart, liver, spleen, lung of Liaoning Cashmere Goats The relative expression of IGF2 and ZBED6 in different tissues of kidney and testis seven was studied. It was found that the expression of ZBED6 in the muscle tissue was the highest and the expression of IGF2 was relatively low; the IGF2 gene expression results were: the liver and kidney, kidney, lung, lung, testis and spleen, and the result of the ZBED6 gene expression was the muscular heart liver kidney testis and the spleen and lung spleen. The study of.3.IGF2 and ZBED6 promoter methylation level was used to predict the promoter region in the muscle tissue of Liaoning cashmere goats. It was found that there were 34 CpG loci in the promoter region of the IGF2 gene, 28 CpG loci in the promoter region of the ZBED6 gene, and the occurrence of the occurrence by the sequencing of hydrogen sulphite (BSP), and the level of IGF2 methylation in the muscle tissue was significantly higher than that of ZBE. The methylation level of D6, combined with the expression profiles of IGF2 and ZBED6, showed that the expression of IGF2 in the muscle tissue was not only regulated by the inhibitory factor ZBED6, but also influenced by the level of methylation in the promoter region. The higher the level of the methylation of the gene, the lower the relative expression of the gene. The above results showed that the muscles of Liaoning cashmere goats were in the muscles. In the process of growth and development, IGF2 and ZBED6 genes play an important role in regulating it. IGF2 encodes 179 amino acids, ZBED6 encoding 980 amino acids.IGF2 and ZBED6 exist in different tissues, and there are differential expressions and DNA methylation modification. These differentially genes have important relationship with the growth and metabolism of muscle cells and metabolism. To study the muscle growth and development of Liaoning cashmere goat, and provide theoretical basis for breeding of Liaoning cashmere goat.
【學(xué)位授予單位】：沈陽農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：S827

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本文編號：2011845