發(fā)布時間：2018-06-08 15:09

  本文選題：家蠶 + ω-脂肪酸脫氫酶�。� 參考：《蠶業(yè)科學(xué)》2017年04期

【摘要】：ω3-脂肪酸脫氫酶是生物體內(nèi)催化多不飽和脂肪酸合成的關(guān)鍵酶之一,其表達(dá)受生物脅迫和非生物脅迫因素的影響。從家蠶蛹中克隆了類ω3-脂肪酸脫氫酶基因(Bm FAD3-like),該基因具有一個長度為1 083 bp的開放閱讀框,編碼由360個氨基酸殘基組成的分子質(zhì)量為41.5 k D的蛋白質(zhì)。將該基因克隆到p YES2.0載體,構(gòu)建重組表達(dá)載體p YBm FAD3-like及重組釀酒酵母工程菌株YBm FAD3-like后進行誘導(dǎo)表達(dá),收集菌體提取脂肪酸,經(jīng)氣相色譜檢測表明異源表達(dá)的重組Bm FAD3-like能夠?qū)⒄T導(dǎo)表達(dá)體系中加入的外源底物亞油酸(LA)轉(zhuǎn)化為α-亞麻酸(ALA)。半定量RT-PCR檢測Bm FAD3-like基因mRNA幾乎在家蠶5齡第3天幼蟲的所有組織中都有轉(zhuǎn)錄,在5齡幼蟲期、蛹期和蛾期的轉(zhuǎn)錄水平較高,并且其轉(zhuǎn)錄水平受低溫(0℃)和真菌(球孢白僵菌Beauveria bassiana)侵染(6~36 h)誘導(dǎo)顯著上調(diào)。對家蠶蛹體注射siRNA沉默目的基因12~72 h后,Bm FAD3-like mRNA轉(zhuǎn)錄水平顯著下調(diào)。研究結(jié)果表明,Bm FAD3-like的表達(dá)產(chǎn)物能催化LA在ω3位脫氫生成ALA,并且該基因在蠶體受到低溫誘導(dǎo)和真菌侵染等脅迫時顯著上調(diào)表達(dá),外源siRNA能夠介導(dǎo)該基因的沉默,顯著下調(diào)其轉(zhuǎn)錄水平。
[Abstract]:蠅 _ 3-fatty acid dehydrogenase is one of the key enzymes for the synthesis of polyunsaturated fatty acids in vivo, and its expression is affected by biological and abiotic stress factors. The omega-3-fatty acid dehydrogenase gene (Bm FAD3-like) was cloned from silkworm pupae. The gene has an open reading frame of 1083 BP and encodes a protein with a molecular weight of 41.5 KD consisting of 360 amino acid residues. The gene was cloned into pYES2.0 vector. The recombinant expression vector pYBm FAD3-like and the recombinant S.cerevisiae engineering strain YBm FAD3-like were constructed. Gas chromatographic analysis showed that the recombinant BmFAD3-like could transform the exogenous substrate linoleic acid into 偽 -linolenic acid ALAA. The mRNA of BmFAD3-like gene was detected by semi-quantitative RT-PCR in almost all tissues of the 5th instar larvae of Bombyx mori, and the transcription level was higher in the 5th instar stage, pupa stage and moth stage. Moreover, the transcription level was significantly up-regulated by fungi (Beauveria bassiana) and fungi (Beauveria bassiana) for 6 h. The transcription level of BmFAD3-like mRNA was significantly down-regulated in silencing of silkworm pupae for 1272 hours. The results showed that the expression product of Bm FAD3-like could catalyze the dehydrogenation of LA into ALAs at 蠅 3 position, and the gene could be upregulated in silkworm under stress of low temperature induction and fungal infection. Exogenous siRNA could mediate the silencing of the gene. The transcription level was significantly down-regulated.
【作者單位】： 江蘇科技大學(xué)生物技術(shù)學(xué)院;中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院蠶業(yè)研究所;
【基金】：公益性行業(yè)(農(nóng)業(yè))科研專項(No.201403064)
【分類號】：Q78;S881.24

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本文編號：1996220