本文選題：煙草 + 有機肥　； 參考：《河南農(nóng)業(yè)大學(xué)》2016年碩士論文

【摘要】：淀粉的含量和組分是影響煙葉質(zhì)量和特色的主要因素之一。為探索煙葉成熟過程中淀粉組分的變化和積累,探討直鏈淀粉對煙葉品質(zhì)的影響,本研究設(shè)計比較不同有機肥處理對煙葉淀粉合成代謝的影響;在此基礎(chǔ)上,克隆煙草NtGBSS1基因,通過農(nóng)桿菌介導(dǎo)法獲得轉(zhuǎn)基因陽性植株,并分析了NtGBSS1基因過表達對植株形態(tài)、淀粉合成酶、淀粉含量和淀粉組分的影響,為研究煙草淀粉合成的分子調(diào)控機制奠定了基礎(chǔ)。主要研究結(jié)果如下:1添加有機肥有利于葉片細(xì)胞中淀粉粒的積累,隨著有機肥施用量的增加,葉綠體中淀粉粒的數(shù)目隨之增多、體積明顯變大;定量檢測發(fā)現(xiàn):總淀粉和支鏈淀粉含量相應(yīng)增加,直鏈淀粉含量反而減少,淀粉組分顯著改變;淀粉合成關(guān)鍵酶基因的表達變化與淀粉含量變化一致,ADPG焦磷酸化酶基因(AGPase)的表達量變化并不明顯,但顆粒結(jié)合型淀粉合成酶基因(GBSS1)的表達量隨有機肥的施用量增加而減弱,可溶性淀粉合成酶基因(SS1)的表達量隨有機肥的施用量增加而增強。2 NtGBSS1基因在煙草中過表達:克隆煙草NtGBSS1基因插入載體,成功構(gòu)建了植物表達載體pCAMBIA1305.1-35S-NtGBSS1-GUS;利用農(nóng)桿菌介導(dǎo)法轉(zhuǎn)化普通煙草K326,在添加潮霉素篩選壓的MS+6-BAl.5+NAA0.15分化培養(yǎng)基上獲得幼芽,在添加同樣篩選壓的生根培養(yǎng)基MS+NAA0.1上進行培養(yǎng),兩周后形成幼苗。RT-PCR和GUS組織化學(xué)染色檢測得到12株陽性植株。3轉(zhuǎn)基因植株的比較分析:將NtGBSS1組成型過表達的陽性株系進行大田種植,觀察其形態(tài)變化,對淀粉合成酶活性、直鏈淀粉、總淀粉含量進行分析。結(jié)果顯示,在煙草中過表達NtGBSS1基因并未影響植株表型;NtGBSS1轉(zhuǎn)基因株系的淀粉總含量不變,但淀粉組分發(fā)生改變,直鏈淀粉含量顯著增加。
[Abstract]:The content and composition of starch is one of the main factors affecting the quality and characteristics of tobacco leaves. In order to explore the changes and accumulation of starch components during tobacco maturation and the effect of amylose on the quality of tobacco leaves, this study was designed to compare the effects of different organic fertilizer treatments on starch synthesis and metabolism in tobacco leaves, and to clone the NtGBSS1 gene of tobacco. Transgenic plants were obtained by Agrobacterium tumefaciens and the effects of overexpression of NtGBSS1 gene on plant morphology, starch synthase, starch content and starch composition were analyzed, which laid a foundation for the study of molecular regulation mechanism of starch synthesis in tobacco. The main results were as follows: (1) the addition of organic fertilizer with 1 / 1 was beneficial to the accumulation of starch granules in leaf cells. With the increase of application amount of organic fertilizer, the number of starch granules in chloroplasts increased and the volume of starch granules in chloroplasts increased obviously. The quantitative analysis showed that the content of total starch and amylopectin increased correspondingly, the amylose content decreased and the starch component changed significantly. The change of the expression of the key enzyme gene of starch synthesis was consistent with the change of starch content. The expression of ADPG pyrophosphorylase gene (AGPase1) was not obvious, but the expression of granular-bound starch synthase gene (GBSS1) decreased with the application of organic fertilizer. The expression of soluble starch synthase gene (SS1) enhanced the overexpression of 2. 2 NtGBSS1 gene in tobacco with the increase of the amount of organic fertilizer. The NtGBSS1 gene was cloned into the vector. The plant expression vector pCAMBIA1305.1-35S-NtGBSS1-GUSwas successfully constructed and transformed into common tobacco K326 by Agrobacterium tumefaciens. Shoots were obtained on MS 6-BAl.5 NAA0.15 differentiation medium supplemented with hygromycin, and cultured on MS NAA0.1, a rooting medium with the same screening pressure. A comparative analysis of 12 transgenic plants was obtained by RT-PCR and GUS histochemical staining after two weeks. The NtGBSS1 component positive lines were planted in the field to observe the morphological changes and the activity of starch synthase. Amylose, total starch content was analyzed. The results showed that the over-expression of NtGBSS1 gene in tobacco did not affect the total starch content, but the amylose content increased significantly.
【學(xué)位授予單位】：河南農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：S572

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本文編號：1971154