發(fā)布時間：2018-05-29 05:01

  本文選題：丙型肝炎病毒(HCV) + 中國　； 參考：《病毒學報》2017年01期

【摘要】：利用反轉(zhuǎn)錄環(huán)介導等溫擴增技術(shù)(RT-LAMP)對中國主要的丙型肝炎病毒(HCV)1b和2a基因型進行擴增。首先,收集臨床采樣標本,對其進行定量和定性。第二,分別根據(jù)HCV 1b和HCV 2a序列的5’非轉(zhuǎn)錄區(qū)(5’UTR)設(shè)計相應的RT-LAMP引物。第三,利用與非特異模板的交叉反應以評價各引物的特異性,利用內(nèi)切酶酶切產(chǎn)物以進一步保證擴增準確。第四,利用倍比稀釋的模板以評價各引物的靈敏性,并用依賴鈣黃綠素/Mn2+的可視化方法與電泳結(jié)果比較。最后,利用RT-LAMP對所有采樣標本進行HCV 1b和HCV 2a兩組平行反應,SPSS統(tǒng)計學軟件對其實用性初步評價。結(jié)果顯示,所設(shè)計的RT-LAMP引物特異性好,HCV 1b和HCV 2a型產(chǎn)物大小均與預期相同。最低可檢測的模板量為100IU/mL,且可視化染色方法電泳結(jié)果相一致。統(tǒng)計學軟件比較擴增結(jié)果表明RT-LAMP與實時熒光定量PCR之間沒有統(tǒng)計學差異(P0.05)。綜上,RT-LAMP設(shè)備簡單,操作簡便,具有在基層醫(yī)療機構(gòu)的應用前景。
[Abstract]:Reverse transcriptional loop mediated isothermal amplification (RT-LAMP) was used to amplify the major hepatitis C virus (HCV) 1b and 2A genotypes in China. First, the clinical samples were collected to carry out quantitative and qualitative analysis. Second, the corresponding RT-LAMP primers were designed according to the 5 'non transcriptional region (5' UTR) of the HCV 1b and HCV 2A sequences. Third. The specificity of the specific template was evaluated to evaluate the specificity of the primers. Fourth, the sensitivity of the primers was evaluated by using the dilution template to evaluate the sensitivity of the primers, and the results were compared with the electrophoretic results using the visualization method dependent on calcein /Mn2+. Finally, all the samples were HC with RT-LAMP. V 1b and HCV 2A two groups were reacted in parallel, and SPSS statistical software was used to evaluate its usability. The results showed that the specificity of RT-LAMP primers was good, the size of HCV 1b and HCV 2 A was the same as expected. The minimum detectable template amount was 100IU/mL, and the visual staining method was the same. Statistics software compared the result of amplification. It shows that there is no statistical difference between RT-LAMP and real time fluorescence quantitative PCR (P0.05). To sum up, the RT-LAMP equipment is simple and easy to operate, and it has the prospect of application in the medical institutions of the grass-roots level.
【作者單位】： 承德醫(yī)學院病原生物學教研室;中國人民解放軍白求恩國際和平醫(yī)院全軍肝病診治中心;
【基金】：全軍醫(yī)藥衛(wèi)生科研基金項目(項目號:CBJ14C010);題目:一種便攜式、簡便、快速檢測病原體核酸新裝置的研制及其在呼吸道傳染病的初步應用
【分類號】：R373.21

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本文編號：1949590