本文選題：Terc~(-/-)小鼠 + 行為活動��； 參考：《福建中醫(yī)藥大學(xué)》2017年碩士論文

【摘要】：目的:觀察不同基因型和不同月齡端粒酶基因敲除小鼠(telomerase-deficient,Terc-/-)行為學(xué)變化特點,并在此基礎(chǔ)上研究針刺足三里穴對Terc-/-小鼠海馬區(qū)TRKB-ERK信號通路蛋白表達的影響。方法:1.選用第3代Terc-/-小鼠,在小鼠3-4周齡時進行分籠、采血,經(jīng)PCR法基因鑒定小鼠基因型。篩選出Terc-/-和野生型小鼠,隨機選出2月齡、3月齡、5月齡、7月齡及9月齡小鼠各8只,共40只。對不同月齡Terc-/-和野生型小鼠進行行為學(xué)檢測。檢測完成后,對檢測數(shù)據(jù)進行分析,觀察Terc-/-和野生型小鼠隨月齡增長其行為學(xué)變化特點。2.分別取24只7月齡Terc-/-和野生型小鼠,隨機分為空白組、手針組和電針組,每組各8只,共48只�？瞻捉M在相同環(huán)境下飼養(yǎng),僅模擬抓握;手針組取雙側(cè)足三里穴直刺約1.5mm,手針刺激30min,每5分鐘行捻轉(zhuǎn)手法一次,每天1次,連續(xù)干預(yù)7天;電針組取雙側(cè)足三里穴直刺約1.5mm,電針刺激30min,交替波,頻率為2/50Hz,強度為2mA,每天1次,連續(xù)干預(yù)7天;干預(yù)結(jié)束后次日取腦組織,采用免疫組化法及免疫印跡法檢驗TRKB、ERK、P-ERK和NF-kB蛋白在海馬區(qū)的表達。結(jié)果:1.Morris水迷宮:與野生型小鼠相比,Terc-/-小鼠隨月齡增長其潛伏期逐漸延長,逃避潛伏期的目標象限時間比逐漸減小,兩組間在2、3和5月齡時無顯著差異(p0.05),但在7和9月齡時有顯著差異(p0.05)。2.自主活動測試:與野生型小鼠相比,Terc-/-小鼠在2、3和5月齡時的自主活動均無顯著差異(P0.05),但在7和9月齡時兩組間出現(xiàn)顯著差異(P0.05)。3.老化度評分:與野生型小鼠相比,Terc-/-小鼠的評分值在2、3月齡時無顯著差異(p0.05),在5、7和9月齡時顯著增高(P0.05)。4.免疫組化法結(jié)果:(1)干預(yù)后Terc-/-小鼠海馬區(qū)TRKB蛋白陽性目標面密度:空白組(0.0233±0.007)、手針組(0.0312±0.005)、電針組(0.0363±0.007),電針組與空白組比較,差異具有顯著性(p0.05);Terc-/-小鼠海馬區(qū)ERK蛋白陽性目標面密度:空白組(0.0148±0.074)、手針組(0.0270±0.010)、電針組(0.0201 ±0.008),手針組與空白組比較,差異具有顯著性(p0.05)。5.免疫印跡法結(jié)果:(1)干預(yù)后Terc-/小鼠海馬區(qū)TRKB蛋白相對體積:空白組(0.6940±0.249)、手針組(0.9525±0.139)、電針組(0.9801±0.129),手針組和電針組與空白組比較,差異均具有顯著性(P0.05)。Terc-/-小鼠海馬區(qū)NF-kB蛋白相對體積:空白組(0.2891±0.070)、手針組(0.4066±0.126)、電針組(0.4856±0.066),手針組和電針組與空白組比較,差異均具有顯著性(P0.05)。結(jié)論:1.與同齡野生型小鼠相比,Terc-/-小鼠隨月齡增長其行為活動出現(xiàn)顯著增齡性變化,Terc-/-小鼠的衰老特點與年齡密切相關(guān),年齡越大,衰老速度及程度越大,尤其在7月齡以后更為明顯。2.針刺"足三里"穴可促進Terc-/-小鼠海馬區(qū)TRKB、ERK和NF-KB蛋白的表達,但對野生型小鼠影響不顯著。
[Abstract]:Aim: to observe the behavioral characteristics of telomerase-deficient Terc-r-r in telomerase gene knockout mice with different genotypes and months, and to study the effect of acupuncture at Zusanli point on the expression of TRKB-ERK signaling pathway protein in the hippocampus of Terc-r-mice. Method 1: 1. The third generation of Terc-r-mice was divided into cages at 3-4 weeks of age and blood was collected. The genotypes of the mice were identified by PCR method. Terc-r- and wild-type mice were selected, and 40 mice were randomly selected, 8 mice were aged from 2 months to 3 months and 5 months from 7 months to 9 months old. The behavior of Terc-r-and wild-type mice were measured at different months of age. After the test was completed, the data were analyzed to observe the behavioral characteristics of Terc-r- and wild-type mice with increasing age. Twenty-four 7-month-old Terc-r- and wild-type mice were randomly divided into blank group, hand acupuncture group and electroacupuncture group with 8 rats in each group and 48 mice in each group. The control group was fed under the same environment, only simulated grip, the hand acupuncture group took bilateral Zusanli acupoint straight needling about 1.5 mm, hand acupuncture stimulation 30 minutes, twirling every 5 minutes, once a day, continuous intervention for 7 days; In the electroacupuncture group, the bilateral Zusanli acupoints were pricked directly for about 1.5 mm, and electroacupuncture was stimulated for 30 minutes, alternately, the frequency was 2 / 50 Hz, the intensity was 2 Ma, once a day for 7 days, and the brain tissue was taken the next day after the intervention. The expression of P-ERK and NF-kB in hippocampus was detected by immunohistochemistry and Western blotting. Results 1. Morris water maze: compared with wild-type mice, the latency of Terc-r-mice increased with the increase of age, and the target quadrant time ratio of escape latency decreased gradually. There was no significant difference between the two groups at the age of 2 and 5 months, but there was a significant difference between the two groups at the age of 7 and 9 months. Autonomous activity test: compared with wild type mice, there was no significant difference in autonomous activity between the two groups at the age of 2 and 5 months, but there was a significant difference between the two groups at the age of 7 and 9 months. Aging score: compared with wild-type mice, there was no significant difference in the scores of Terc-r-mice at the age of 2 to 3 months, but significantly increased at the age of 5 and 9 months. The results of immunohistochemical method showed that the positive surface density of TRKB protein in the hippocampal area of Terc-r-mice after intervention was 0.0233 鹵0.007 in blank group, 0.0312 鹵0.005 in hand acupuncture group, 0.0363 鹵0.007 in electroacupuncture group and 0.0363 鹵0.007 in electroacupuncture group. The positive target surface density of ERK protein in hippocampal area of mice was significantly higher than that in control group (0.0148 鹵0.074), hand acupuncture group (0.0270 鹵0.010), electroacupuncture group (0.0201 鹵0.008). The difference between hand acupuncture group and blank group was significant (p 0.05. 5). The results of Western blotting showed that the relative volume of TRKB protein in hippocampal area of Terc-/ mice after intervention was 0.6940 鹵0.249, 0.9525 鹵0.139 and 0.9801 鹵0.129 in the control group, 0.9801 鹵0.129 in the electroacupuncture group, respectively. The comparison between the hand acupuncture group and the electroacupuncture group was compared with that in the blank group. The relative volume of NF-kB protein in hippocampal area of mice was significantly different from that in control group (0.2891 鹵0.070), hand acupuncture group (0.4066 鹵0.126) and electroacupuncture group (0.4856 鹵0.066). Conclusion 1. Compared with the wild-type mice of the same age, the behavior of Terc-r-mice increased significantly with age. The aging characteristics of Terc-r-mice were closely related to their age. The older the age, the greater the speed and degree of senescence, especially after the age of 7 months. Acupuncture at "Zusanli" (Zusanli) could promote the expression of TRKBERK and NF-KB in the hippocampal area of Terc-r-mice, but had no significant effect on wild-type mice.
【學(xué)位授予單位】：福建中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R245

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本文編號：1903606