發(fā)布時(shí)間：2018-05-18 00:30

  本文選題：干細(xì)胞 + Peinado積分法　； 參考：《天津醫(yī)科大學(xué)》2017年碩士論文

【摘要】：目的通過比較正常結(jié)腸粘膜、結(jié)腸腺瘤(包括管狀腺瘤、絨毛狀腺瘤、絨毛-管狀腺瘤)、腺瘤癌變及結(jié)腸癌組織中NF-kB受體激活子RANK及其配體RANKL的表達(dá)差異,從而探討RANK和RANKL在結(jié)腸上皮序列轉(zhuǎn)化中的作用及其與腫瘤干細(xì)胞的關(guān)系。方法采用免疫組織化學(xué)S-P法檢測結(jié)腸上皮序列轉(zhuǎn)化的不同階段病變中RANK和RANKL表達(dá)的差異,分析它們的臨床病理意義,探討兩因子結(jié)腸上皮序列的轉(zhuǎn)化過程中的作用。檢測結(jié)腸上皮序列轉(zhuǎn)化的不同階段病變中CD133、NF-kB的表達(dá)情況,同時(shí)進(jìn)行CD31標(biāo)記計(jì)數(shù)微血管密度(MVD),比較RANK及RANKL與CD133、CD31、NF-kB表達(dá)的相關(guān)性,分析CD133、NF-kB因子的表達(dá)情況,計(jì)數(shù)CD31標(biāo)記的微血管密度(MVD),比較RANK和RANKL與CD133、CD31、NF-kB表達(dá)的相關(guān)性以及RANK和RANKL的表達(dá)與腫瘤干細(xì)胞的關(guān)系。以40例正常結(jié)腸粘膜組織作為對照組,采用Peinado計(jì)數(shù)方法分析上述幾項(xiàng)指標(biāo)在結(jié)腸上皮序列轉(zhuǎn)化的不同階段病變中的差別和它們之間的相互關(guān)系,所得數(shù)據(jù)經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析并結(jié)合隨訪情況進(jìn)行評(píng)價(jià)。結(jié)果1.臨床病例資料回顧本研究共收集2012年~2014年天津醫(yī)科大學(xué)腫瘤醫(yī)院存檔的結(jié)腸腺瘤、腺瘤癌變和結(jié)腸癌標(biāo)本120例以及正常結(jié)腸粘膜40例。以上樣本均是具有完整的臨床病理資料和隨訪資料,所有標(biāo)本的患者術(shù)前都沒有接受放療或化療治療。且明確存檔的石蠟包埋組織標(biāo)本,所有標(biāo)都采用中性福爾馬林固定,經(jīng)正規(guī)石蠟包埋并切片。并由兩位具有豐富經(jīng)驗(yàn)和資質(zhì)的病理診斷醫(yī)師按照WHO的《病理組織學(xué)分類》復(fù)習(xí)病理切片對其進(jìn)行證實(shí)。2.在結(jié)腸上皮序列轉(zhuǎn)化的不同病變階段中RANK和RANKL的表達(dá)與臨床病理意義2.1 RANK在結(jié)腸上皮序列轉(zhuǎn)化的不同病變階段中的表達(dá)與臨床病理意義RANK的陽性表達(dá)產(chǎn)物呈棕黃色,主要表達(dá)于結(jié)腸癌細(xì)胞的細(xì)胞膜和細(xì)胞漿,呈彌漫性分布。在正常粘膜、結(jié)腸腺瘤、腺瘤癌變和結(jié)腸癌中RANK的陽性率表達(dá)分別為0(0/40)、7.5%(3/40)、70.0%(28/40)和87.5%(35/40),此結(jié)果提示RANK在腺瘤癌變及結(jié)腸癌組織中的表達(dá)明顯高于正常粘膜組和結(jié)腸腺瘤組,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),并且在正常結(jié)腸粘膜→結(jié)腸腺瘤→腺瘤癌變→結(jié)腸腺癌這一序列轉(zhuǎn)化過程中RANK的表達(dá)呈逐漸增高趨勢,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。在結(jié)腸上皮病變轉(zhuǎn)化序列的不同階段中,RANK與腫瘤的組織學(xué)分級(jí)和大小密切相關(guān)(χ2=152.395,P0.01;χ2=61.403,P0.05)。腫瘤級(jí)別越高,RANK的陽性表達(dá)越強(qiáng);腫瘤體積越大,RANK的陽性表達(dá)越強(qiáng)。RANK的陽性表達(dá)與性別和年齡無關(guān)(χ2=3.218,P0.05;χ2=2.114,P0.05)。2.2 RANKL在結(jié)腸上皮序列轉(zhuǎn)化的不同病變階段中的表達(dá)與臨床病理意義RANKL的陽性表達(dá)產(chǎn)物呈棕黃色,主要表達(dá)于結(jié)腸癌細(xì)胞的細(xì)胞膜和細(xì)胞漿,呈彌漫性分布。在正常粘膜、結(jié)腸腺瘤、腺瘤癌變和結(jié)腸癌中RANKL的陽性表達(dá)率分別為0(0/40)、10.0%(4/40)、67.5%(27/40)和85.0%(34/40),此結(jié)果提示RANKL在腺瘤癌變及結(jié)腸癌組織中的表達(dá)明顯高于正常粘膜組和結(jié)腸腺瘤組,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),并且在正常結(jié)腸粘膜→結(jié)腸腺瘤→腺瘤癌變→結(jié)腸腺癌這一序列轉(zhuǎn)化過程中RANKL的表達(dá)呈逐漸增高趨勢,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。RANKL與腫瘤的組織學(xué)分級(jí)和大小密切相關(guān)(χ2=147.436,P0.01;χ2=61.413,P0.05)。腫瘤級(jí)別越高,RANKL的陽性表達(dá)越強(qiáng);腫瘤體積越大,RANKL的陽性表達(dá)越強(qiáng)。RANKL的陽性表達(dá)與性別和年齡無關(guān)(χ2=3.219,P0.05;χ2=2.121,P0.05)。3.在結(jié)腸上皮序列轉(zhuǎn)化的不同病變階段中CD133、NF-k B、CD31的表達(dá)與臨床病理意義3.1 CD133在結(jié)腸上皮序列轉(zhuǎn)化的不同病變階段中的表達(dá)與臨床病理意義CD133的陽性細(xì)胞產(chǎn)物呈棕黃色,主要定位于結(jié)腸上皮細(xì)胞的細(xì)胞膜和細(xì)胞漿,呈彌漫性分布。在正常粘膜、結(jié)腸腺瘤、腺瘤癌變和結(jié)腸癌中CD133的陽性細(xì)胞率分別為10.0%(4/40)、15.0%(6/40)、47.5%(19/40)和57.5%(23/40)。此結(jié)果提示CD133在腺瘤癌變及結(jié)腸癌組織中的陽性細(xì)胞明顯多于正常粘膜組和腺瘤組,其差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),并且在正常結(jié)腸粘膜→結(jié)腸腺瘤→腺瘤癌變→結(jié)腸腺癌這一序列轉(zhuǎn)化過程中CD133的陽性細(xì)胞呈逐漸增高趨勢,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。在結(jié)腸上皮轉(zhuǎn)化序列的不同病變階段中,CD133與腫瘤的組織學(xué)分級(jí)和大小密切相關(guān)(χ2=148.884,P0.01;χ2=57.472,P0.05)。腫瘤級(jí)別越高,CD133的陽性細(xì)胞越多;腫瘤體積越大,CD133的陽性細(xì)胞越多。CD133的陽性細(xì)胞的多少與性別和年齡無關(guān)(χ2=3.473,P0.05;χ2=2.238,P0.05)。3.2 NF-kB在結(jié)腸上皮序列轉(zhuǎn)化的不同病變階段中的表達(dá)與臨床病理意義NF-kB的陽性表達(dá)產(chǎn)物呈棕黃色,主要定位于結(jié)腸上皮細(xì)胞的細(xì)胞膜和細(xì)胞漿,呈彌漫性分布。在正常粘膜、結(jié)腸腺瘤、腺瘤癌變和結(jié)腸癌中NF-kB的陽性表達(dá)率分別為10.0%(4/40)、12.5%(5/40)、50.0%(20/40)和55.0%(22/40)。此結(jié)果提示NF-kB在腺瘤癌變及結(jié)腸癌組織中的表達(dá)明顯高于正常粘膜組和結(jié)腸腺瘤組,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),并且在正常結(jié)腸粘膜→結(jié)腸腺瘤→腺瘤癌變→結(jié)腸腺癌這一序列轉(zhuǎn)化過程中NF-kB的表達(dá)呈逐漸增高趨勢,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。在結(jié)腸上皮轉(zhuǎn)化序列的不同病變階段中,NF-kB與腫瘤的組織學(xué)分級(jí)和大小密切相關(guān)(χ2=145.385,P0.01;χ2=57.472,P0.05)。腫瘤級(jí)別越高,NF-kB的陽性表達(dá)越強(qiáng);腫瘤體積越大,NF-kB的陽性表達(dá)越強(qiáng)。NF-kB的陽性表達(dá)與性別和年齡無關(guān)(χ2=2.786,P0.05;χ2=2.524,P0.05)。3.3 CD31在結(jié)腸上皮序列轉(zhuǎn)化的不同病變階段中的表達(dá)與臨床病理意義CD31的陽性表達(dá)呈棕黃色,主要定位于血管內(nèi)皮細(xì)胞,呈彌漫性分布。在正常粘膜、結(jié)腸腺瘤、腺瘤癌變和結(jié)腸癌中CD31標(biāo)記的MVD計(jì)數(shù)分別為0.05±0.22、4.75±1.01、4.90±1.01和5.25±0.98。此結(jié)果提示MVD在結(jié)腸腺瘤組、腺瘤癌變及結(jié)腸癌組織中明顯高于正常粘膜組,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),并且在正常結(jié)腸粘膜→結(jié)腸腺瘤→腺瘤癌變→結(jié)腸腺癌這一序列轉(zhuǎn)化過程中MVD呈逐漸增高趨勢,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。在結(jié)腸上皮轉(zhuǎn)化序列的不同病變階段中,MVD與腫瘤的組織學(xué)分級(jí)和大小密切相關(guān)(χ2=87.436,P0.01;χ2=66.563,P0.05)。腫瘤級(jí)別越高,MVD逐漸增高;腫瘤體積越大,MVD越高。MVD的高低與性別和年齡無關(guān)(χ2=3.473,P0.05;χ2=2.238,P0.05)。4.在結(jié)腸上皮序列轉(zhuǎn)化的不同病變階段中RANK、RANKL、CD133、和NF-kB之間的相關(guān)性4.1 RANK與RANKL在結(jié)腸上皮病變轉(zhuǎn)化序列中表達(dá)的相關(guān)性通過Spearman等級(jí)相關(guān)分析,RANK與RANKL的表達(dá)在整個(gè)結(jié)腸上皮序列轉(zhuǎn)化過程中呈正相關(guān)(rs=0.652,P0.01),其中在正常結(jié)腸粘膜組織中RANK與RANKL的表達(dá)無明顯相關(guān)性(P0.05),而在結(jié)腸腺瘤組織、腺瘤癌變組織和結(jié)腸癌組織中RANK與RANKL的表達(dá)呈正相關(guān)(rs=0.389,P0.05;rs=0.568,P0.05;rs=0.716,P0.01)。4.2 RANK與CD133在結(jié)腸上皮病變轉(zhuǎn)化序列中表達(dá)的相關(guān)性通過Spearman等級(jí)相關(guān)分析,RANK與CD133的表達(dá)在整個(gè)結(jié)腸上皮序列轉(zhuǎn)化過程中呈正相關(guān)(rs=0.838,P0.01),其中在正常結(jié)腸粘膜組織中RANK與CD133的表達(dá)無明顯相關(guān)性(P0.05),而在結(jié)腸腺瘤組織、腺瘤癌變組織和結(jié)腸癌組織中RANK與CD133的表達(dá)呈正相關(guān)(rs=0.479,P0.05;rs=0.350,P0.05;rs=0.605,P0.01)。4.3 CD133與RANKL在結(jié)腸上皮病變轉(zhuǎn)化序列中表達(dá)的相關(guān)性通過Spearman等級(jí)相關(guān)分析,RANKL與CD133的表達(dá)在整個(gè)結(jié)腸上皮序列轉(zhuǎn)化過程中呈正相關(guān)(rs=0.863,P0.01),其中在正常結(jié)腸粘膜組織中RANKL與CD133的表達(dá)無明顯相關(guān)性(P0.05),而在結(jié)腸腺瘤組織、腺瘤癌變組織和結(jié)腸癌組織中RANKL與CD133的表達(dá)呈正相關(guān)(rs=0.448,P0.05;rs=0.329,P0.05;rs=0.588,P0.01)。4.4 CD133與NF-kB在結(jié)腸上皮病變轉(zhuǎn)化序列中表達(dá)的相關(guān)性通過Spearman等級(jí)相關(guān)分析,CD133與NF-kB的表達(dá)在整個(gè)結(jié)腸上皮序列轉(zhuǎn)化過程中呈正相關(guān)(rs=0.497,P0.01),其中在正常結(jié)腸粘膜組織中CD133與NF-kB的表達(dá)無明顯相關(guān)性(P0.05),而在結(jié)腸腺瘤組織、腺瘤癌變組織和結(jié)腸癌組織中CD133與NF-kB的表達(dá)呈正相關(guān)(rs=0.382,P0.05;rs=0.324,P0.05;rs=0.537,P0.01)。4.5 RANK與NF-kB在結(jié)腸上皮病變轉(zhuǎn)化序列中表達(dá)的相關(guān)性通過Spearman等級(jí)相關(guān)分析,RANK與NF-kB的表達(dá)在整個(gè)結(jié)腸上皮序列轉(zhuǎn)化過程中呈正相關(guān)(rs=0.529,P0.01),其中在正常結(jié)腸粘膜組織中RANK與NF-kB的表達(dá)無明顯相關(guān)性(P0.05),而在結(jié)腸腺瘤組織、腺瘤癌變組織和結(jié)腸癌組織中RANK與NF-kB的表達(dá)呈正相關(guān)(rs=0.412,P0.05;rs=0.341,P0.05;rs=0.599,P0.01)。此結(jié)果提示,RANK基因的異常表達(dá)與NF-kB上調(diào)在整個(gè)結(jié)腸上皮序列轉(zhuǎn)化的發(fā)展過程中可能發(fā)揮了一定的作用,RANK基因的異常表達(dá)可能參與了調(diào)控NF-kB信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的整個(gè)過程。4.6 RANKL與NF-kB在結(jié)腸上皮病變轉(zhuǎn)化序列中表達(dá)的相關(guān)性通過Spearman等級(jí)相關(guān)分析,RANKL與NF-kB的表達(dá)在整個(gè)結(jié)腸上皮序列轉(zhuǎn)化過程中呈正相關(guān)(rs=0.518,P0.01),其中在正常結(jié)腸粘膜組織中RANKL與NF-kB的表達(dá)無明顯相關(guān)性(P0.05),而在結(jié)腸腺瘤組織、腺瘤癌變組織和結(jié)腸癌組織中RANKL與NF-kB的表達(dá)呈正相關(guān)(rs=0.408,P0.05;rs=0.323,P0.05;rs=0.590,P0.01)。此結(jié)果提示,RANKL的異常表達(dá)與NF-kB上調(diào)在整個(gè)結(jié)腸上皮序列轉(zhuǎn)化的發(fā)展過程中可能發(fā)揮了一定的作用,RANKL基因的異常表達(dá)同樣也可能參與了調(diào)控NF-kB信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的整個(gè)過程。結(jié)論1.RANK基因及其配體表達(dá)的上調(diào)在整個(gè)結(jié)腸上皮序列轉(zhuǎn)化的發(fā)展過程中可能發(fā)揮了一定的作用,RANK基因及其配體的異常表達(dá)可能參與了結(jié)腸癌的發(fā)生發(fā)展,并通過促進(jìn)侵襲參與了腫瘤的演變。2.在整個(gè)結(jié)腸上皮序列轉(zhuǎn)化過程中,CD133陽性細(xì)胞的數(shù)量與RANK基因及其配體的陽性表達(dá)呈正相關(guān)性,即在正常結(jié)腸粘膜→結(jié)腸腺瘤→腺瘤癌變→結(jié)腸腺癌這一序列轉(zhuǎn)化過程中,隨著CD133陽性細(xì)胞的增多,RANK基因及其配體的陽性表達(dá)也增加。提示RANK基因及其配體介導(dǎo)的NF-kB信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路可以激活bcl-2的抗凋亡基因,在結(jié)腸腺瘤→腺瘤癌變→結(jié)腸癌的轉(zhuǎn)化中抑制腫瘤細(xì)胞的凋亡,并且促進(jìn)了結(jié)腸上皮細(xì)胞的惡性轉(zhuǎn)化,從而使各因子的陽性表達(dá)明顯增加;同時(shí),NF-kB信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路通過在基因及蛋白表達(dá)兩個(gè)水平上調(diào)控C-IAP的表達(dá),抑制Caspase-8的活化,阻止腫瘤細(xì)胞凋亡的發(fā)生。此外,NF-kB可通過間接誘導(dǎo)生存因子或直接激活細(xì)胞周期蛋白D1的轉(zhuǎn)錄來促進(jìn)細(xì)胞G1/S期的進(jìn)程,從而促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的增殖。提示RANK基因及其配體RANKL的表達(dá)在結(jié)腸上皮轉(zhuǎn)化序列中對結(jié)腸上皮腫瘤細(xì)胞可能具有特異性,可通過活化NF-kB信號(hào)通路從而抑制結(jié)腸上皮腫瘤細(xì)胞的凋亡,誘導(dǎo)并促進(jìn)結(jié)腸腫瘤的發(fā)生。因此,RANK基因及其配體介導(dǎo)的NF-kB信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的異�？赡転榻Y(jié)腸癌細(xì)胞惡性表型的明顯特征之一,并可能為結(jié)腸癌形成過程中的早期事件。3.CD133陽性細(xì)胞、NF-kB及MVD在結(jié)腸上皮序列轉(zhuǎn)化過程的不同病變階段中依次升高,并且在整個(gè)結(jié)腸上皮序列轉(zhuǎn)化過程中,RANK和RANKL的表達(dá)分別與CD133陽性細(xì)胞、NF-kB呈正相關(guān)。此結(jié)果提示RANK基因及其配體的異常表達(dá)與CD133陽性細(xì)胞、NF-kB上調(diào)在整個(gè)結(jié)腸上皮序列轉(zhuǎn)化的發(fā)展過程中可能發(fā)揮了一定的作用,RANK基因及其配體的異常表達(dá)可能通過參與調(diào)控NF-kB信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路抑制腫瘤干細(xì)胞的凋亡,進(jìn)而使腫瘤發(fā)生侵襲。4.對RANK基因及其配體進(jìn)行觀察研究可能成為結(jié)腸癌發(fā)生機(jī)制探討、高危病例篩選及估測預(yù)后的一種新的途徑。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R735.3

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：1903578