本文選題：藏豬 + β-防御素�。� 參考：《江蘇農(nóng)業(yè)學(xué)報》2017年04期

【摘要】：為了構(gòu)建藏豬β-防御素2(pBD-2)成熟肽原核表達載體,從藏豬肝組織中提取總RNA,通過RT-PCR獲取pBD-2目的基因,并與pMD19-T載體連接構(gòu)建重組質(zhì)粒,命名為pMD19T-pBD-2;以pMD19T-pBD-2質(zhì)粒為模板,克隆pBD-2成熟肽c DNA序列并構(gòu)建成熟肽p ET-32a-pBD-2表達質(zhì)粒。結(jié)果顯示,藏豬pBD-2基因全長為298bp,與野豬和家豬的pBD-2基因同源性分別達100.0%和98.9%;藏豬pBD-2基因具有1個完整的開放閱讀框,編碼69個氨基酸組成的多肽,包含21個氨基酸殘基的信號肽、11個氨基酸殘基的前導(dǎo)肽和37個氨基酸殘基的成熟肽;編碼的pBD-2成熟肽穩(wěn)定性較好,分子量4 085.78,等電點8.89,具有6個半胱氨酸(Cys)殘基,7個帶正電荷和2個帶負電荷的氨基酸殘基,為親脂性和親水性多肽;從pMD19T-pBD-2質(zhì)粒中亞克隆得到長度為114 bp藏豬pBD-2成熟肽c DNA序列,菌落PCR、酶切和測序鑒定證明成功構(gòu)建了成熟肽pET-32a-pBD-2原核表達質(zhì)粒。
[Abstract]:In order to construct the prokaryotic expression vector of 尾 -defensin 2pBD-2) mature peptide, total RNAs were extracted from Tibetan pig liver tissue, and the target gene of pBD-2 was obtained by RT-PCR. The recombinant plasmid was named pMD19T-pBD-2, which was named as pMD19T-pBD-2. The recombinant plasmid was named pMD19T-pBD-2. The sequence of pBD-2 mature peptide c DNA was cloned and the expression plasmid of mature peptide p ET-32a-pBD-2 was constructed. The results showed that the total length of pBD-2 gene of Tibetan pig was 298bp. the homology of pBD-2 gene with wild pig and domestic pig was 100.0% and 98.9.The pBD-2 gene of Tibetan pig had a complete open reading frame and encoded 69 amino acid polypeptides. The signal peptide containing 21 amino acid residues, the leading peptide of 11 amino acid residues and the mature peptide of 37 amino acid residues have good stability. The molecular weight is 4 085.78, the isoelectric point is 8. 89, with 6 cysteine cysts, 7 positively charged and 2 negatively charged amino acid residues, which are lipophilic and hydrophilic polypeptides. The prokaryotic expression plasmid of mature peptide pET-32a-pBD-2 was successfully constructed by colony PCR, restriction endonuclease digestion and sequencing.
【作者單位】： 四川農(nóng)業(yè)大學(xué)動物醫(yī)學(xué)院動物微生態(tài)研究中心;成都農(nóng)業(yè)科技職業(yè)學(xué)院;綿陽泰科生物技術(shù)有限公司;
【基金】：四川省高等學(xué)�？萍紕�(chuàng)新團隊資助項目(KM406183.1) 四川農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)科雙支計劃項目(03570434)
【分類號】：S828

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本文編號：1878562