本文選題：乙酰肝素酶 + 乳腺癌��； 參考：《中國(guó)老年學(xué)雜志》2017年13期

【摘要】：目的通過(guò)構(gòu)建短發(fā)夾RNA(shRNA)慢病毒載體,轉(zhuǎn)染乳腺癌MDA-MB-231細(xì)胞,探討慢病毒攜帶的shRNA對(duì)乳腺癌細(xì)胞乙酰肝素酶(HPA)基因表達(dá)的沉默作用。方法采用RNA干擾(RNAi)序列設(shè)計(jì)原則,以乳腺癌HPA基因?yàn)榘谢?將構(gòu)建5對(duì)shRNA重組慢病毒載體,轉(zhuǎn)染乳腺癌MDA-MB-231細(xì)胞,通過(guò)Western印跡檢測(cè)HPA-shRNA對(duì)MDA-MB-231細(xì)胞HPA蛋白表達(dá)水平的影響;用CCK-8的方法檢測(cè)HPA-shRNA對(duì)乳腺癌細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制作用及5-氟尿嘧啶(5-Fu)對(duì)乳腺癌細(xì)胞的殺傷作用,運(yùn)用transwell實(shí)驗(yàn)檢測(cè)HPA-shRNA對(duì)乳腺癌細(xì)胞侵襲能力的影響。進(jìn)一步,運(yùn)用流式分析的方法檢測(cè)HPA-shRNA對(duì)乳腺癌細(xì)胞周期的影響。建立小鼠轉(zhuǎn)移瘤模型,檢測(cè)HPA-shRNA在體內(nèi)對(duì)乳腺癌細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制作用。結(jié)果成功構(gòu)建HPA-shRNA重組慢病毒載體。在體外,實(shí)驗(yàn)組HPA-shRNA1組、HPA-shRNA3組、HPA-shRNA4組有效沉默了人乳腺癌MDA-MB-231細(xì)胞HPA的表達(dá),HPA蛋白表達(dá)明顯降低(P0.05)。HPA-shRNA1對(duì)乳腺癌細(xì)胞的生長(zhǎng)具有良好的抑制作用,HPA-shRNA1能夠增加乳腺癌細(xì)胞對(duì)5-Fu的敏感性。此外,HPA-shRNA1能夠誘導(dǎo)乳腺癌細(xì)胞在S期發(fā)生細(xì)胞周期阻滯。在體內(nèi),HPA-shRNA1組HPA基因mRNA相對(duì)表達(dá)量明顯低于陰性對(duì)照組(P0.05),HPA-shRNA1能夠沉默乳腺癌移植瘤HPA mRNA表達(dá)。在體內(nèi)HPA-shRNA1同樣能夠抑制乳腺癌細(xì)胞生長(zhǎng)。結(jié)論 HPA-shRNA重組慢病毒載體可有效抑制乳腺癌HPA基因的表達(dá),進(jìn)而發(fā)揮良好的抗腫瘤作用。
[Abstract]:Objective to construct a short hairpin RNA-shRNA-lentivirus vector and transfect it into breast cancer MDA-MB-231 cells to investigate the silencing effect of lentivirus-carrying shRNA on the expression of heparinase (HPA) gene in breast cancer cells. Methods five pairs of shRNA recombinant lentivirus vectors were constructed and transfected into breast cancer MDA-MB-231 cells by using the RNA interference RNAi sequence design principle. The effect of HPA-shRNA on HPA protein expression in MDA-MB-231 cells was detected by Western blot. The growth inhibition of HPA-shRNA on breast cancer cells and the killing effect of 5-Fu on breast cancer cells were detected by CCK-8. The effect of HPA-shRNA on the invasion ability of breast cancer cells was detected by transwell assay. Furthermore, the effect of HPA-shRNA on the cell cycle of breast cancer was detected by flow cytometry. Mouse metastatic tumor model was established to detect the inhibitory effect of HPA-shRNA on the growth of breast cancer cells in vivo. Results HPA-shRNA recombinant lentivirus vector was successfully constructed. In vitro, HPA-shRNA3 group (HPA-shRNA1 group) effectively silenced the expression of HPA in human breast cancer MDA-MB-231 cells. HPA-shRNA1 significantly inhibited the growth of breast cancer cells. HPA-shRNA1 could increase the sensitivity of breast cancer cells to 5-Fu. In addition, HPA-shRNA1 can induce cell cycle arrest in S phase of breast cancer cells. The relative expression of HPA gene mRNA in the HPA-shRNA1 group was significantly lower than that in the negative control group (P0.05HPA-shRNA1). HPA-shRNA1 could silence the expression of HPA mRNA in breast cancer xenografts. HPA-shRNA1 also inhibited the growth of breast cancer cells in vivo. Conclusion HPA-shRNA recombinant lentivirus vector can effectively inhibit the expression of HPA gene in breast cancer and play a good anti-tumor effect.
【作者單位】： 承德醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院外一科;承德醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院小兒內(nèi)科;
【基金】：承德市科學(xué)技術(shù)研究與發(fā)展計(jì)劃項(xiàng)目(No.20151029)
【分類號(hào)】：R737.9

【參考文獻(xiàn)】

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【共引文獻(xiàn)】

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【二級(jí)參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：1878712