發(fā)布時間：2018-05-11 03:00

  本文選題：Nectin + 巢氏PCR�。� 參考：《中國獸醫(yī)科學》2016年01期

【摘要】：采用巢式PCR方法獲得未見報道的綿羊Nectin4基因。根據(jù)GenBank上登錄的牛的Nectin4mRNA序列信息設計并合成10對引物;從綿羊肺支氣管組織中提取總RNA,采用隨機引物和Oligo(dT)將其反轉錄為cDNA;利用巢式PCR原理和PCR引物錯配導致非特異反應的特點,改變常規(guī)PCR反應條件,將10對引物分為2組,通過兩輪PCR即獲得大小片段相符的片段;TA克隆后測序證實已成功獲得綿羊Nectin4基因的完整ORF,證明本方法可作為一種獲取未知基因的方法,較RACE等其他傳統(tǒng)技術有明顯優(yōu)勢;構建了重組表達質粒pCMV-Myc-Nectin 4,在CHO細胞的細胞質中獲得高效表達,經Western-blot分析,表達的Nectin 4蛋白的大小與預期符合。綿羊Nectin4基因的成功擴增為后續(xù)對其在病毒入侵中的功能進行研究奠定了基礎。
[Abstract]:Sheep Nectin4 gene was obtained by nested PCR method. Ten pairs of primers were designed and synthesized according to the information of Nectin4mRNA sequence of cattle registered on GenBank; total RNAs were extracted from sheep lung bronchi tissue and reversely transcribed into cDNAusing random primers and OligodT.The nested PCR principle and the characteristics of PCR primer mismatch led to nonspecific reactions. Ten pairs of primers were divided into 2 groups by changing the conventional PCR reaction conditions. The complete ORF of sheep Nectin4 gene has been obtained successfully by two rounds of PCR sequencing. It is proved that this method can be used as a method to obtain unknown genes, which has obvious advantages over other traditional techniques such as RACE. The recombinant expression plasmid pCMV-Myc-Nectin _ 4 was constructed and highly expressed in the cytoplasm of CHO cells. The size of the expressed Nectin _ 4 protein was in accordance with the expectation by Western-blot analysis. The successful amplification of sheep Nectin4 gene laid a foundation for further study on its function in virus invasion.
【作者單位】： 河南科技學院動物科學學院;中國農業(yè)科學院蘭州獸醫(yī)研究所家畜疫病病原生物學國家重點實驗室甘肅省動物寄生蟲病重點實驗室;甘肅農業(yè)大學動物科學技術學院;中國農業(yè)科學院北京畜牧獸醫(yī)研究所動物營養(yǎng)國家重點實驗室;
【基金】：現(xiàn)代農業(yè)產業(yè)技術體系建設專項(CARS-40-10) 公益性行業(yè)(農業(yè))科研專項經費項目(201103008) 河南省高等學校重點科研項目(15A230002)
【分類號】：S826;S852.65

【參考文獻】

相關期刊論文 前1條

1 逯光文;高福;嚴景華;;麻疹病毒受體與病毒侵入[J];生物工程學報;2013年01期

【共引文獻】

相關期刊論文 前5條

1 徐雷;馮若飛;馬忠仁;;病毒受體研究進展[J];動物醫(yī)學進展;2015年02期

2 李三妮;張古英;李瑞宏;東蕾;馮超;;400例麻疹住院患兒藥物治療情況分析[J];兒科藥學雜志;2015年05期

3 胡一冰;王艷菊;郭少燕;;麻疹合并肺炎患兒使用中藥擦浴的臨床效果及護理要點[J];成都中醫(yī)藥大學學報;2015年02期

4 姜波濤;;酶聯(lián)免疫反應加速儀在麻疹病毒IgM抗體檢測中的應用[J];檢驗醫(yī)學與臨床;2015年05期

5 吳彬;孟晨鑫;;成人麻疹合并肺炎65例臨床分析[J];中國現(xiàn)代藥物應用;2015年01期

相關博士學位論文 前1條

1 陳蕾;小反芻獸疫病毒血凝素蛋白與宿主受體相互作用的研究[D];中國農業(yè)科學院;2014年

相關碩士學位論文 前1條

1 全傳松;犬瘟熱病毒實時定量RT-PCR方法的建立及單克隆抗體的制備[D];中國農業(yè)科學院;2014年

，

本文編號：1872095