本文選題：林麝 + 大腸桿菌　； 參考：《西北農(nóng)林科技大學(xué)》2017年碩士論文

【摘要】：林麝是國(guó)家一級(jí)保護(hù)動(dòng)物,麝香具有較高的藥用價(jià)值。為保護(hù)和發(fā)展林麝資源,增加麝香產(chǎn)量,我國(guó)自1958年開(kāi)始進(jìn)行人工養(yǎng)殖林麝的研究,但是由于各種疾病和環(huán)境等因素的影響,養(yǎng)殖規(guī)模一直受到限制。尤其是大腸桿菌導(dǎo)致的林麝肺炎發(fā)病率及死亡率均較高,為林麝養(yǎng)殖業(yè)造成了很大的危害。2016年2月陜西寶雞某林麝養(yǎng)殖基地人工繁殖林麝突然發(fā)病,自行用青霉素、鏈霉素等藥物治療后效果不明顯并且出現(xiàn)死亡病例。對(duì)死亡林麝剖檢觀察,發(fā)現(xiàn)主要病變?cè)诜闻K。為確定導(dǎo)致林麝發(fā)病的病原菌,從死亡林麝肺臟進(jìn)行細(xì)菌分離,對(duì)分離所得細(xì)菌進(jìn)行生化特性、耐藥性、致病性、16SrRNA序列分析以及毒力基因的檢測(cè)。主要獲得以下結(jié)果:1.從林麝的病變組織中分離到2株細(xì)菌,菌株1和菌株2。在血平板上菌株1為表面光滑,半透明,直徑3mm左右的灰白色菌落,鏡檢呈革蘭氏陰性短桿菌,兩端鈍圓,成對(duì)或散在;菌株2為表面光滑,邊緣整齊,半透明,直徑1mm左右的灰白色菌落,鏡檢呈革蘭氏陰性桿菌,聚集成堆。2.經(jīng)糖發(fā)酵試驗(yàn)(葡萄糖、麥芽糖、乳糖、阿拉伯糖)、M.R試驗(yàn)、V-P試驗(yàn)、靛基質(zhì)試驗(yàn)、檸檬酸鹽利用試驗(yàn)共5項(xiàng)生化試驗(yàn)鑒定,根據(jù)《伯杰氏細(xì)菌鑒定手冊(cè)》判斷標(biāo)準(zhǔn),可以確定分離所得菌株1和菌株2均為大腸桿菌。3.對(duì)分離所得菌株進(jìn)行16SrRNA序列測(cè)定,并與標(biāo)準(zhǔn)參考菌株進(jìn)行序列比對(duì)分析。結(jié)果表明,兩株細(xì)菌的核苷酸序列與大腸桿菌核苷酸的同源性為100%,菌株1與Escherichia coli O104:H4序列相似性較高、菌株2與Escherichia coli O78序列相似性較高。由此可將菌株1和菌株2確定為大腸桿菌。4.用藥敏試驗(yàn)檢測(cè)了兩株分離菌對(duì)抗生素的耐藥性,發(fā)現(xiàn)頭孢類(lèi)(頭孢唑啉、頭孢曲松鈉)和單環(huán)β-內(nèi)酰胺類(lèi)(氨曲南)對(duì)2株林麝肺部致病性大腸桿菌均敏感;氨基糖苷類(lèi)(鏈霉素)對(duì)其均中度敏感;對(duì)其他類(lèi)別抗生素均呈現(xiàn)不同程度的耐藥性。將治療藥物由青霉素、鏈霉素改成頭孢曲松鈉和氨曲南后,效果較好。5.致病性試驗(yàn)結(jié)果顯示菌株1和菌株2均有較強(qiáng)的毒性,腹腔注射72 h之后,試驗(yàn)組小白鼠死亡率為75%。死亡小白鼠肺臟中可以分別分離到菌株1和菌株2。6.毒力基因檢測(cè)試驗(yàn)中,兩株分離菌株均檢出了ompA基因,其他的粘附素類(lèi)(afa/draB、iha、sfa/focCD)、鐵轉(zhuǎn)運(yùn)系統(tǒng)類(lèi)(sitD ep.a、sitD chr.、iucD.a)、血清類(lèi)(neuC)和毒素類(lèi)(sat、vat)9種毒力基因均未檢出。綜上所述,本研究中的病例是由于大腸桿菌引起的林麝肺炎,且分離出的大腸桿菌具有很強(qiáng)的耐藥性和致病性,經(jīng)藥敏試驗(yàn)結(jié)果指導(dǎo)治療及以分離菌株為抗原制成疫苗免疫后病情得到控制。
[Abstract]:Forest musk deer is a national first-class protected animal, musk has high medicinal value. In order to protect and develop the resources of forest musk deer and increase the production of musk musk, the study on artificial cultivation of forest musk deer has been carried out in China since 1958. However, due to the influence of various diseases and environmental factors, the scale of cultivation has been restricted. In particular, the incidence and mortality of pneumonia in forest musk deer caused by Escherichia coli were high, which caused great harm to the forest musk deer breeding industry. In February 2016, the artificially propagated forest musk deer in a forest musk deer breeding base in Baoji, Shaanxi Province, suddenly developed a disease and used penicillin on their own. The effect of streptomycin and other drugs after treatment is not obvious and there are death cases. The main pathological changes of the dead forest musk deer were found in the lungs. In order to identify the pathogenic bacteria causing the disease of the forest musk deer, the bacteria were isolated from the lungs of the dead forest musk deer. The biochemistry characteristics, drug resistance, pathogenicity of 16s rRNA sequence and virulence gene were analyzed. The main results are as follows: 1. Two strains of bacteria, strain 1 and strain 2. On the blood plate, strain 1 was a grayish white colony with a smooth surface, translucent and 3mm diameter. Microscopic examination showed Gram-negative short bacilli with obtuse circles at both ends in pairs or scattered, and strain 2 had a smooth surface, neat edges and translucent surfaces. The grayish white colonies about the diameter of 1mm showed Gram-negative bacilli by microscope and gathered in piles of. 2. 2. The sugar fermentation tests (glucose, maltose, lactose, arabinosaccharide) M.R test V-P test, indigo matrix test, citrate utilization test were identified by 5 biochemical tests. It can be confirmed that both strain 1 and strain 2 are Escherichia coli. The isolated strains were sequenced by 16SrRNA and compared with standard reference strains. The results showed that the nucleotide sequence of the two strains was 100% homology with that of Escherichia coli, the similarity between strain 1 and Escherichia coli O104:H4 sequence was high, and the similarity between strain 2 and Escherichia coli O78 sequence was higher. Therefore, strain 1 and strain 2 can be identified as Escherichia coli. The antibiotic resistance of two isolates to antibiotics was tested by drug sensitivity test. It was found that both cefazolin and ceftriaxone sodium and monocyclic 尾-lactam (aztreonam) were sensitive to two strains of pathogenic Escherichia coli in the lung of musk deer forest. The aminoglycosides (streptomycin) were moderately sensitive to them and showed resistance to other antibiotics to varying degrees. After changing the therapeutic drugs from penicillin, streptomycin to ceftriaxone sodium and aztreonam, the effect was better. 5. The pathogenicity test showed that both strain 1 and strain 2 had strong toxicity. After 72 hours of intraperitoneal injection, the mortality of mice in the experimental group was 75. Strain 1 and strain 2.6 could be isolated from the lungs of dead mice respectively. In virulence gene test, ompA gene was detected in two isolated strains, but 9 virulence genes were not detected in other adhesin class, such as afa / drab Bhaha / fa / foci, iron transport system, sitD ep.asitD chr. neuc, serum neuC) and toxin satvatanus. To sum up, the case in this study is caused by the forest musk deer pneumonia caused by Escherichia coli, and the isolated Escherichia coli has strong resistance and pathogenicity. The treatment was guided by the results of drug sensitivity test and the disease was controlled after the vaccine was immunized with the isolated strain as antigen.
【學(xué)位授予單位】：西北農(nóng)林科技大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類(lèi)號(hào)】：S858.94

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本文編號(hào)：1866696