本文選題：新城疫病毒 + 融合蛋白F��； 參考：《中國畜牧獸醫(yī)》2017年06期

【摘要】：本試驗(yàn)旨在利用桿狀病毒表達(dá)系統(tǒng)對基因Ⅶ型新城疫病毒(NDV)F基因進(jìn)行表達(dá)研究。RT-PCR擴(kuò)增F基因,將其克隆到pFastBac HT A載體中,陽性重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化DH10Bac感受態(tài)細(xì)胞,PCR鑒定獲得陽性克隆,堿裂解法提取陽性質(zhì)粒,轉(zhuǎn)染Sf9昆蟲細(xì)胞,獲得含F(xiàn)基因的重組桿狀病毒質(zhì)粒,重組病毒感染Sf9細(xì)胞72h后,進(jìn)行SDSPAGE電泳、間接免疫熒光和Western blotting檢測。免疫SPF雞,間接ELISA測定抗體滴度,攻毒保護(hù)試驗(yàn)檢測重組F蛋白保護(hù)性。結(jié)果顯示,F蛋白在昆蟲細(xì)胞中能夠特異性表達(dá),該蛋白誘導(dǎo)了高滴度的NDV特異性抗體,具有良好的免疫原性;重組F蛋白免疫組攻擊保護(hù)率達(dá)到90%,明顯高于陰性對照組。本研究結(jié)果為NDV新型亞單位疫苗的研究奠定了基礎(chǔ)。
[Abstract]:The aim of this experiment was to use baculovirus expression system to express gene VII (NDV) F gene and.RT-PCR amplification of F gene. The gene was cloned into pFastBac HT A vector, the positive recombinant plasmid was transformed into DH10Bac receptive cells, the positive clones were obtained by PCR identification, the positive plasmids were extracted by alkaline lysis, and Sf9 insect cells were transfected into Sf9 insect cells. Recombinant baculovirus plasmid containing F gene, after recombinant virus infection Sf9 cell 72h, SDSPAGE electrophoresis, indirect immunofluorescence and Western blotting detection. Immune SPF chicken, indirect ELISA assay antibody titer, attack protection test to detect the recombinant F protein protection. The results show that F egg white can be specifically expressed in insect cells, this protein lure. The NDV specific antibody with high titer has good immunogenicity, and the protection rate of the recombinant F protein immunization group is 90%, which is significantly higher than that of the negative control group. The results of this study lay the foundation for the study of the new subunit vaccine of NDV.

【作者單位】： 徐州生物工程職業(yè)技術(shù)學(xué)院;
【基金】：徐州生物工程職業(yè)技術(shù)學(xué)院畜牧獸醫(yī)品牌專業(yè)建設(shè)項目 2015年徐州市科技計劃項目(KC15N0016)
【分類號】：S852.65

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本文編號：1866704