發(fā)布時(shí)間：2018-05-01 18:17

  本文選題：肝細(xì)胞癌 + COMMD7��； 參考：《第三軍醫(yī)大學(xué)》2016年碩士論文

【摘要】：目的和意義:在世界范圍內(nèi),肝細(xì)胞癌的發(fā)病率在常見的惡性腫瘤中已經(jīng)排名第五,且每年至少增加100萬(wàn)新發(fā)病例,且中絕大部分發(fā)生在我國(guó)。作為一個(gè)乙肝大國(guó),肝癌在我國(guó)有著廣泛的疾病基礎(chǔ)。肝臟移植和手術(shù)治療是最為理想的治療方式,但是手術(shù)切除率低、術(shù)后復(fù)發(fā)率高,病人生存率及生存質(zhì)量偏低,總體治療效較差。隨著基因研究水平的不斷提高,我們對(duì)肝癌的認(rèn)識(shí)越加深入,意識(shí)到肝癌是一個(gè)受到多基因調(diào)控的腫瘤。分析鑒定肝癌相關(guān)基因及研究不同調(diào)控基因間的相互作用機(jī)制,尋找調(diào)控網(wǎng)絡(luò)中的關(guān)鍵基因及調(diào)控因素,研發(fā)抗腫瘤的靶向治療藥物已經(jīng)成為肝細(xì)胞癌研究的熱點(diǎn)。方法:設(shè)計(jì)針對(duì)COMMD7基因的特異性siRNA(smallinterference RNA)轉(zhuǎn)染人類肝癌細(xì)胞株HepG2,作為干擾組(Si-HepG2);并設(shè)置PTEN抑制劑處理組(Si+Bpv-HepG2);空白對(duì)照組(HepG2);空載體對(duì)照組(N-HepG2)。q RT-PCR檢測(cè)轉(zhuǎn)染后各組COMMD7、PTEN基因m RNA的表達(dá)變化;Western blot檢測(cè)各組COMMD7、PTEN、p-AKT和AKT蛋白的表達(dá)變化;MSP法檢測(cè)PTEN基因甲基化水平;CCK8法檢測(cè)細(xì)胞增殖能力;Transwell實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞在轉(zhuǎn)染前后轉(zhuǎn)移及侵襲能力的改變。結(jié)果:siRNA-Commd7轉(zhuǎn)染HepG2細(xì)胞后,qRT-PCR檢測(cè)結(jié)果顯示與空白對(duì)照組及空載體對(duì)照組相比較干擾組COMMD7基因的表達(dá)量降低了90%,PTEN基因的表達(dá)量升高了184%,均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05);Western blot檢測(cè)結(jié)果顯示:siRNA干擾組COMMD7表達(dá)明顯降低,PTEN表達(dá)升高;下游p-AKT表達(dá)受到顯著抑制;PTEN抑制劑處理組PTEN表達(dá)受到顯著抑制,下游p-AKT的表達(dá)明顯增強(qiáng);MSP法檢測(cè)PTEN基因的甲基化水平:干擾組與空白對(duì)照組及空載體對(duì)照組相比較發(fā)生明顯的去甲基化,表明抑制COMMD7表達(dá)可誘導(dǎo)PTEN去甲基化。CCK8實(shí)驗(yàn)結(jié)果:干擾組細(xì)胞較空白對(duì)照組及空載體對(duì)照組和PTEN抑制劑處理組增殖速度明顯降低,均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05);Transwell實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示:干擾組穿膜細(xì)胞數(shù)(17.4±2.7)較空載體對(duì)照組(36.2±3.2)、空白對(duì)照組(41.6±4.5)及PTEN抑制劑處理組(47.6±1.8)明顯減少,均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異P0.05。結(jié)論:siRNA干擾下調(diào)COMMD7基因的表達(dá),可誘導(dǎo)HepG2細(xì)胞內(nèi)抑癌基因PTEN的去甲基化,增加PTEN蛋白的表達(dá)而抑制PI3K/AKT信號(hào)通路,以降低HepG2細(xì)胞的增殖、遷移及侵襲能力。
[Abstract]:Objective and significance: in the world, the incidence of hepatocellular carcinoma has ranked fifth among the common malignant tumors, and at least 1 million new cases are increasing every year, most of which occur in China. As a large country of hepatitis B, liver cancer has a broad disease base in China. Liver transplantation and surgical treatment are the most ideal treatment methods, but the resection rate is low, the recurrence rate is high, the survival rate and quality of life are low, the overall curative effect is poor. With the development of gene research, our understanding of liver cancer is more and more profound, and we realize that liver cancer is a tumor regulated by many genes. Analysis and identification of hepatoma related genes and study of the interaction mechanism between different regulatory genes, search for the key genes and regulatory factors in regulatory networks, research and development of anti-tumor targeted therapy drugs have become a hot spot in the research of hepatocellular carcinoma. Methods: the specific siRNA(smallinterference RNAs targeting COMMD7 gene were designed and transfected into human hepatoma cell line HepG2 as interference group, and PTEN inhibitor treatment group was set up with SiBpv-HepG2; blank control group with HepG2; empty vector control group with N-HepG2TEN. Q RT-PCR was used to detect the m RNA of COMMD7PTEN gene after transfection. The expression of PTEN gene methylation level was detected by PTEN gene methylation level and the cell proliferation ability was detected by CCK8 method. Transwell assay was used to detect the change of cell metastasis and invasion ability before and after transfection. Results after transfection of HepG2 cells with 10% siRNA-Commd7, the results of qRT-PCR showed that the expression of COMMD7 gene in interference group decreased compared with blank control group and blank vector control group, and the expression of COMMD7 gene in interference group was increased by 1844%. The results showed that the expression of COMMD7 decreased significantly in the group of small siRNA interference, and the expression of PTEN increased significantly. The downstream p-AKT expression was significantly inhibited in the PTEN inhibitor treated group, and the PTEN expression was significantly inhibited in the PTEN inhibitor treatment group. The expression of downstream p-AKT was significantly enhanced to detect the methylation level of PTEN gene. There was significant demethylation in the interference group compared with the blank control group and the blank vector control group. The results showed that inhibition of COMMD7 expression could induce PTEN demethylation. The results showed that the proliferation rate of the cells in the interference group was significantly lower than that in the blank control group, empty vector control group and PTEN inhibitor treatment group. The results of Transwell experiment showed that the number of perforating cells in the interference group was significantly lower than that in the blank vector control group (36.2 鹵3.2), the blank control group (41.6 鹵4.5) and the PTEN inhibitor treatment group (47.6 鹵1.8). Conclusion the down-regulation of COMMD7 gene expression by COMMD7 interference can induce the demethylation of PTEN, increase the expression of PTEN protein, and inhibit the PI3K/AKT signaling pathway in HepG2 cells, so as to reduce the proliferation, migration and invasion of HepG2 cells.
【學(xué)位授予單位】：第三軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R735.7

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本文編號(hào)：1830530