本文選題：紫云英 + 實時熒光定量PCR��； 參考：《農(nóng)業(yè)生物技術(shù)學報》2017年08期

【摘要】：在實時熒光定量PCR(qRT-PCR)分析中,選擇合適的內(nèi)參基因是保證檢測結(jié)果準確性的先決條件。紫云英(Astragalus sinicus)基因組信息匱乏,內(nèi)參基因的選擇尤為重要。本研究篩選了7個持家基因GAPDH、Cons7、ELF1B、Tubulin、Ubiquitin E2、Actin A以及Actin 20,利用qRT-PCR技術(shù)研究持家基因的表達情況,并采用GeNorm、NormFinder和Best Keeper軟件,分析其在紫云英不同組織(根、莖、葉、花和莢果)和不同非生物脅迫(干旱脅迫、澇脅迫、鹽脅迫、脫落酸(abscisic acid,ABA)脅迫)條件下葉片中的表達穩(wěn)定性。結(jié)果表明,7種內(nèi)參基因在紫云英不同的組織器官和不同的脅迫處理分析中,穩(wěn)定性表現(xiàn)不盡相同。Cons7在鹽脅迫和澇脅迫處理下最穩(wěn)定,Tubulin、Actin 20和GAPDH分別在不同組織、ABA處理和干旱脅迫下表達最穩(wěn)定。因此,采用qRT-PCR分析紫云英不同器官組織中的基因表達差異時,可選擇Tubulin作為校正內(nèi)參基因;而比較脫落酸處理、鹽脅迫和澇脅迫處理時,可選擇Cons7作為校正內(nèi)參基因;比較干旱脅迫處理時,選擇GAPDH作為校正內(nèi)參基因。本研究結(jié)果為研究紫云英不同生理過程中目的基因表達提供了穩(wěn)定可靠的內(nèi)參基因。
[Abstract]:In real-time fluorescence quantitative PCRQ RT-PCRanalysis, the selection of appropriate internal reference genes is a prerequisite to ensure the accuracy of the detection results. The genomic information of Astragalus sinicus is scarce, so the selection of internal reference gene is particularly important. In this study, seven housekeeping genes (GAPDHHN Cons7ELF1B tubulin Ubiquitin E2Actin A and Actin 20) were screened. The expression of homemaker gene was studied by qRT-PCR technique. The results were analyzed by using GeNorm Norm Finder and Best Keeper software in different tissues (root, stem, leaf). Stability of expression in leaves under flower and pod stress and abiotic stress (drought, waterlogging, salt stress, abscisic acididae ABA) stress. The results showed that seven internal reference genes were analyzed in different tissues and organs and under different stress treatments. The stability of Cons7 was the most stable under salt stress and waterlogging stress, and the expression of tubulin tin-20 and GAPDH were most stable in different tissues, respectively. Therefore, when qRT-PCR was used to analyze the difference of gene expression in different organs and tissues, Tubulin could be selected as the corrected reference gene, while Cons7 could be selected as the corrected reference gene when compared with abscisic acid treatment, salt stress and waterlogging stress. In comparison with drought stress, GAPDH was selected as the corrected reference gene. The results of this study provide a stable and reliable internal reference gene for studying the expression of target gene in different physiological processes.
【作者單位】： 浙江省農(nóng)業(yè)科學院環(huán)境資源與土壤肥料研究所;江西省農(nóng)業(yè)科學院土壤肥料與資源環(huán)境研究所;中國農(nóng)業(yè)科學院農(nóng)業(yè)資源與農(nóng)業(yè)區(qū)劃研究所;
【基金】：浙江省自然科學基金(No.LY14D010004) 公益性行業(yè)(農(nóng)業(yè))科研專項(No.201103005)
【分類號】：Q943.2;S551.9

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本文編號：1824776