本文選題：心肌細(xì)胞 + RNA干擾�。� 參考：《畜牧與獸醫(yī)》2017年08期

【摘要】：為了研究H9c2心肌細(xì)胞RNA干擾的轉(zhuǎn)染條件,篩選結(jié)構(gòu)型熱休克蛋白70(Hsc70)干擾序列,采用流式細(xì)胞儀和Western blot方法,研究不同劑量比例熒光標(biāo)記的siRNA(FAM-siRNA)和不同濃度脂質(zhì)體2000(Lipofectamine 2000)對轉(zhuǎn)染效率的影響,進(jìn)一步篩選Hsc70 siRNA的最佳沉默序列。結(jié)果顯示:流式細(xì)胞儀試驗(yàn)得出的最佳轉(zhuǎn)染條件為80 nmol/L FAM-siRNA+1.5μL Lipofectamine 2000;Western blot結(jié)果表明,Oligo 2、Oligo 3和Oligo 4組中的Hsc70蛋白表達(dá)極顯著降低(P0.01),其中Oligo 3組的沉默效率最高;轉(zhuǎn)染后48 h收獲細(xì)胞為最佳轉(zhuǎn)染時(shí)間。結(jié)果表明:80 nmol/L FAM-siRNA+1.5μL Lipofectamine 2000為最佳轉(zhuǎn)染條件,以O(shè)ligo 3為最佳RNA干擾靶基因。
[Abstract]:In order to study the transfection conditions of RNA interference in H9c2 cardiomyocytes, the interference sequence of structural heat shock protein 70 (Hsc70) was screened by flow cytometry and Western blot.The effects of fluorescent labeled siRNA-FAM-siRNAs and liposome 2000(Lipofectamine 2000) on transfection efficiency were studied, and the best silencing sequence of Hsc70 siRNA was screened.The results showed that the optimal transfection conditions were 80 nmol/L FAM-siRNA 1.5 渭 L Lipofectamine 2000 Western blot. The results showed that the expression of Hsc70 protein in Oligo 2 oligo 3 and Oligo 4 groups was significantly decreased, and the silencing efficiency of Oligo 3 group was the highest.The best transfection time was 48 h after transfection.The results showed that 2000 nmol/L FAM-siRNA 1.5 渭 L Lipofectamine 2000 was the best transfection condition and Oligo 3 was the best target gene for RNA interference.
【作者單位】： 福建龍巖學(xué)院生命科學(xué)學(xué)院;南京農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院;
【基金】：農(nóng)業(yè)部公益性行業(yè)(農(nóng)業(yè))專項(xiàng)子項(xiàng)目(201003060-11) 福建龍巖學(xué)院博士啟動(dòng)項(xiàng)目(LB2014003)
【分類號(hào)】：S852.3

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：1753062