本文選題：ChrA + 工程菌�。� 參考：《南方醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)》2017年10期

【摘要】：目的研究鉻(Ⅵ)轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白編碼基因ChrA工程菌的抗鉻(Ⅵ)能力及鉻(Ⅵ)抗性機(jī)制。方法以沙雷氏菌S2基因組作為模板,PCR擴(kuò)增ChrA基因,連接表達(dá)載體pET-28a(+),轉(zhuǎn)化至E.coli BL21表達(dá)。測(cè)定ChrA工程菌的Cr(Ⅵ)抗性、攝取能力和外排Cr(Ⅵ)能力,探索鉻(Ⅵ)負(fù)載時(shí)間、含氧陰離子(硫酸鹽、鉬酸鹽、釩酸鹽、鎢酸鹽)和呼吸抑制劑(纈氨霉素、寡霉素、CN-、NADH)對(duì)其抗Cr(Ⅵ)能力的影響,分析ChrA蛋白轉(zhuǎn)運(yùn)Cr(Ⅵ)的機(jī)制路徑。結(jié)果成功構(gòu)建pET-28a(+)-ChrA工程菌,并表達(dá)出膜蛋白ChrA;ChrA工程菌的Cr(Ⅵ)吸收能力低于對(duì)照株(P0.05),Cr(Ⅵ)外排能力高于對(duì)照株(P0.05);工程菌在50 mg/L Cr_2O_7~(2-)中負(fù)載30 min,新鮮溶液中釋放10 min后,菌體中的Cr(Ⅵ)外排量達(dá)到20%,但隨著鉻(Ⅵ)負(fù)載時(shí)間延長(zhǎng),外排量逐漸減少;工程菌外排能力受含氧陰離子硫酸鹽和鉬酸鹽顯著抑制(P0.05),推測(cè)ChrA蛋白是通過(guò)硫酸鹽通道運(yùn)輸Cr(Ⅵ),而鎢酸鹽和釩酸鹽對(duì)其Cr(Ⅵ)外排無(wú)明顯抑制或促進(jìn)作用;在抑制劑類別中,K+載體纈氨霉素、CN-顯著性抑制其Cr(Ⅵ)外排,NADH促進(jìn)其Cr(Ⅵ)外排(P0.05),而寡霉素?zé)o明顯抑制或促進(jìn)作用,表明ChrA蛋白外排鉻(Ⅵ)是利用質(zhì)子動(dòng)力通過(guò)細(xì)胞膜化學(xué)滲透作用把鉻離子泵出細(xì)胞外。結(jié)論 ChrA蛋白具有將Cr(Ⅵ)從胞漿轉(zhuǎn)運(yùn)至胞外的作用,ChrA的表達(dá)提高了大腸桿菌的鉻(Ⅵ)抗性能力。
[Abstract]:Objective to study the resistance of chromium (鈪，

本文編號(hào)：1750111