本文選題：結(jié)石 + 茵陳蒿湯�。� 參考：《天津醫(yī)科大學》2017年碩士論文

【摘要】：目的:膽石病(GD,gallstone disease)是腹部外科的常見病,脂代謝基因在其發(fā)病過程中發(fā)揮重要作用。本文旨在研究脂代謝相關(guān)基因在膽結(jié)石形成不同階段的表達水平差異及脂代謝相關(guān)基因產(chǎn)物之間可能存在的代謝路徑,并利用熊去氧膽酸(UDCA,ursodeoxycholic acid)、茵陳蒿湯(YCHD,yinchenhao decoction)、中藥復方(CPH,comprehensive prescription of herbs)、復方大柴胡湯(DCHD,dachaihu decoction)以及大黃素(EMO,emodin)等藥物對膽囊膽固醇結(jié)石模型小鼠進行治療,觀察藥物治療下脂代謝相關(guān)基因表達的情況。方法:C57BL/6J小鼠在適應性喂養(yǎng)2周(W,weeks)后,隨機分為以下9組:i)0周(0W)組,ii)4周(4W)組,iii)8周(8W)組,iv)8周基礎飼料(RD,regular rodent diet)組,v)8周UDCA(UDCA)組,vi)8周YCHD(YCHD)組,vii)8周CPH(CPH)組,viii)8周DCHD(DCHD)組,ix)8周EMO(EMO)組。除RD組小鼠施以RD喂養(yǎng),其余各組均喂養(yǎng)致石飼料(LD,lithogenic diet);此外,前兩組的喂養(yǎng)時間為0W、4W,其余各組均為8W;正式實驗期間,各組均使用等體積的蒸餾水、UDCA、YCHD、CPH、DCHD、EMO對小鼠進行灌胃給藥。其中RD和0W組為空白對照組,8W組為結(jié)石模型組。實驗結(jié)束后取血,觀察并記錄結(jié)石發(fā)生率(簡稱結(jié)石率),抽取膽汁,收集膽囊內(nèi)的結(jié)石,并獲得肝臟、膽囊等組織備用。此后,分析結(jié)石成分,檢測膽汁的脂質(zhì)水平,計算膽固醇飽和指數(shù)(CSI,cholesterol saturation index),并依照Carey量表來評估膽汁致石性。部分肝臟組織用于病理學研究。運用實時熒光定量聚合酶鏈反應(RT-PCR,real-time polymerase chain reaction)技術(shù)檢測小鼠的肝臟X受體(Lxr)、ATP結(jié)合盒B亞家族成員4轉(zhuǎn)運蛋白(Abcb4)、Abcb11、ATP結(jié)合轉(zhuǎn)運蛋白G超家族成員5(Abcg5)、Abcg8、膽固醇7α羥化酶(Cyp7a1)、氧固醇7α羥化酶(Cyp7b1)、固醇調(diào)節(jié)元件結(jié)合蛋白(Srbp2)、3-羥-3-甲基戊二酸單酰輔酶還原酶(Hmgcr)、過氧化物酶增殖物活化受體(Ppar)等基因的相對表達水平。結(jié)果:預實驗表明小鼠膽囊膽固醇結(jié)石的發(fā)生率為100%。正式試驗中,RD、0W、4W和8W組的結(jié)石率分別為0、0、50%和100%,結(jié)石率在UDCA、YCHD、CPH、DCHD和EMO組相較于8W組均有所降低,分別為30%、40%、40%、60%和70%。結(jié)石定性為膽固醇結(jié)石。膽汁膽固醇(BC,bile cholesterol)、磷脂(PL,phospholipids)、總膽汁酸(TBA,total bile acid)以及CSI水平隨著喂養(yǎng)LD時間的延長而呈現(xiàn)出上升趨勢,其中TBA在4W組出現(xiàn)最高濃度。而三種脂質(zhì)及CSI在UDCA、YCHD、CPH組呈現(xiàn)出相反的趨勢,BC、PL、CSI下降,TBA上升。蘇木精和伊紅染色(HE,hematoxylin eosin)表明0W、RD組肝臟結(jié)構(gòu)無明顯異常,8W組肝臟損傷嚴重,細胞排列紊亂,胞質(zhì)內(nèi)脂肪空泡滿視野,細胞核被擠向一側(cè),且胞核疏松。UDCA、YCHD、CPH、DCHD、EMO以及4W組的HE染色情況較8W組肝臟組織染色略有好轉(zhuǎn)。RT-PCR檢測結(jié)果顯示,隨著0~8W喂養(yǎng)時間的進行,Abcb4、Abcg5、Abcg8、Lxr、Ppar m RNA等的基因水平表現(xiàn)出明顯上升,相反地,Cyp7a1、Srebp2、Cyp7b1的基因表達量下降。值得注意的是,UDCA組的Abcb11、Abcg8、Cyp27a1 m RNA的相對表達量較8W組升高,而其Lxr、Ppar水平較8W組降低;Cyp7a1、Cyp7b1、Lxr和Hmgcr m RNA在YCHD組的基因相對表達量約為8W組的3倍;相較于8W組而言,CPH可明顯下調(diào)Abcb4、Ppar和Lxr的基因表達水平;DCHD組中Cyp7a1和Cyp27a1 m RNA的水平較8W組明顯升高,而Srebp2呈現(xiàn)下降趨勢;EMO組中的Fxr、Cyp7a1、Cyp27a1、Ppar m RNA水平均升高。結(jié)論:Abcg5、Srebp2、Abcg8、Abcb4、Cyp7a1、Cyp7b1、Ppar m RNA等脂代謝相關(guān)基因的異常表達可能有助于結(jié)石的形成。UDCA、YCHD、CPH、DCHD和EMO均有不同程度的降低結(jié)石率、保護肝臟、改善膽汁脂質(zhì)水平、降低膽汁致石性的功效,Cyp7a1、Cyp7b1、Lxr和Hmgcr m RNA可能是YCHD逆轉(zhuǎn)結(jié)石形成的有效作用靶點。UDCA可以通過改變Abcb11、Abcg8、Cyp27a1、Ppar、Lxr m RNA的基因表達水平,進而有效溶解結(jié)石;CPH可通過減少Lxr、Abcb4、Ppar m RNA的表達以實現(xiàn)其減緩結(jié)石形成的目的;DCHD可通過調(diào)控Cyp7a1、Cyp27a1、Srebp2 m RNA而減少結(jié)石形成;EMO可通過改變Fxr、Cyp7a1、Cyp27a1和Ppar m RNA的相對表達量而延緩結(jié)石產(chǎn)生的進程。
[Abstract]:Objective: gallstone disease (GD, gallstone disease) is a common disease of the abdominal surgery, lipid metabolism genes play an important role in the pathogenesis of metabolic pathways may exist. This paper aims to study the formation of lipid metabolism related genes differential expression levels in different periods and lipid metabolism related gene products in gallstones between, and the use of ursodeoxycholic acid (UDCA, ursodeoxycholic, acid) (YCHD, Yinchenhao Decoction of Yinchenhao Decoction, Chinese medicine compound (CPH), comprehensive prescription of herbs), Hu Tang (DCHD Dachaihu, Dachai compound decoction) and emodin (EMO, emodin) on cholesterol gallstone model mice were treated with other drugs, to observe the lipid metabolism related gene expression in drug therapy under the situation. Methods: C57BL/6J mice at 2 weeks of feeding (W, weeks), were randomly divided into 9 groups: I) for 0 weeks (0W) group, II) for 4 weeks (4W) group, III) for 8 weeks (8W) group, IV) for 8 weeks of feeding 鏂，

本文編號：1749297