本文選題：實時熒光定量PCR + 拷貝數(shù)　； 參考：《核農(nóng)學(xué)報》2016年04期

【摘要】：快捷、準確地檢測轉(zhuǎn)基因植物中外源基因的拷貝數(shù),是轉(zhuǎn)基因生物育種的重要研究內(nèi)容,具有較大的應(yīng)用前景。本研究以7個抗蟲BT(Bacillus thuringiensis)和抗草甘膦EPSPS-G10轉(zhuǎn)基因大豆事件為材料,以SYBR Green I為熒光染料,利用實時熒光定量PCR方法,根據(jù)PCR反應(yīng)獲得的Ct值與起始模板數(shù)的對數(shù)值存在線性反比關(guān)系這一原理,建立了相關(guān)性系數(shù)在0.99以上的模板定量標線。通過目的基因與內(nèi)參基因——大豆肌動蛋白編碼基因ACTIN的起始模板量比較,估算出各株系的目的基因拷貝數(shù)。數(shù)據(jù)顯示,株系1、2、3和4的2個基因均為單拷貝,株系6的2個基因均有2個拷貝,株系5和7的2個基因的拷貝數(shù)為3。利用Southern印跡方法對材料1~4的拷貝數(shù)進行驗證,結(jié)果表明,兩者的檢測結(jié)果基本一致,證明實時熒光PCR檢測法是大豆外源基因拷貝數(shù)檢測中快速有效的方法。實時熒光PCR高效快速檢測基因拷貝數(shù),對于大規(guī)模轉(zhuǎn)基因株系的外源基因拷貝數(shù)檢測應(yīng)用具有重大意義。
[Abstract]:Rapid and accurate detection of the copy number of foreign genes in transgenic plants is an important research content in transgenic biological breeding and has a great application prospect.In this study, 7 insect-resistant BT(Bacillus thuringiensis) and glyphosate resistant EPSPS-G10 transgenic soybean events were used as materials, SYBR Green I was used as fluorescent dye, and real-time fluorescence quantitative PCR method was used.Based on the principle that there is a linear inverse relationship between the Ct value and the logarithmic value of the initial template number obtained by PCR reaction, the template quantitative marking with correlation coefficient above 0.99 is established.The copy number of the target gene was estimated by comparing the initial template quantity of the target gene with that of the soybean actin encoding gene (ACTIN).The data showed that the two genes of strain 1, 2, 2 and 4 were all single copies, the 2 genes of line 6 had 2 copies, and the copy numbers of 2 genes of lines 5 and 7 were 3.The Southern blot method was used to verify the copy number of the material 1H4. The results showed that the two methods were basically the same. It was proved that the real-time fluorescent PCR assay was a rapid and effective method for the detection of foreign gene copy number of soybean.High efficiency and fast detection of gene copy number by real-time fluorescent PCR is of great significance for the detection of foreign gene copy number in large-scale transgenic lines.
【作者單位】： 浙江大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院植物生理與生物化學(xué)國家重點實驗室;
【基金】：農(nóng)業(yè)部轉(zhuǎn)基因生物新品種培育重大專項基金(2014ZX08004-001,2014ZX0800401B-002)
【分類號】：S565.1

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本文編號：1736630