本文選題：豬霍亂沙門菌C500　切入點(diǎn)：鼠傷寒沙門菌D6　出處：《揚(yáng)州大學(xué)》2017年碩士論文

【摘要】：食品安全是一重要的社會(huì)民生問題,豬肉是人類主要的動(dòng)物食品,但豬及其制品易受沙門菌感染,威脅著食品安全及人類健康。豬霍亂沙門菌為宿主適應(yīng)性沙門菌,易引起2-4月齡仔豬副傷寒病,發(fā)病死亡率較高,對養(yǎng)豬業(yè)中有著嚴(yán)重的危害。同時(shí),鼠傷寒沙門菌作為沙門菌最常見血清型,其動(dòng)物宿主廣泛,包括豬,是重要的食源性病原菌之一,也是人類食物中毒主要原因。實(shí)踐證明,疫苗是防控豬沙門菌病的有效措施之一。豬霍亂沙門菌C500株已經(jīng)作為減毒疫苗使用40余年,該疫苗可從動(dòng)物飼養(yǎng)源頭控制沙門菌對動(dòng)物的感染和侵害,能有效預(yù)防仔豬副傷寒,并減少沙門菌對肉產(chǎn)品的污染,從而減少沙門菌通過食物鏈感染人類,阻斷沙門菌人畜之間傳播,防止沙門菌病的發(fā)生。該疫苗在疾病防控中發(fā)揮重大作用,但遺憾的是動(dòng)物接種該疫苗后不能通過基于玻板凝集的試驗(yàn)方法,簡單快速鑒別動(dòng)物是被免疫還是被感染(Differentiating Infected from Vaccinated Animals,DIVA)。為此,本研究構(gòu)建豬霍亂沙門菌的LPS相關(guān)基因rfaJ缺失株,致力于區(qū)分免疫動(dòng)物和自然感染動(dòng)物。另外,還構(gòu)建了鼠傷寒沙門菌D6的rfaJ缺失株,并對它們生物學(xué)特性和免疫保護(hù)進(jìn)行了評價(jià),初步探索了rfaJ基因在DIVA疫苗設(shè)計(jì)及其鑒別診斷中的應(yīng)用潛能。1.豬霍亂沙門菌rfaJ基因缺失株的構(gòu)建及其生物學(xué)特性研究本研究利用λ-red同源重組方法構(gòu)建了豬霍亂沙門菌C500?rfaJ缺失株,測序和PCR鑒定結(jié)果表明,rfaJ基因從基因組中缺失,同時(shí)構(gòu)建了回復(fù)株C500?rfaJ::rfaJ。缺失株C500?rfaJ的生長速度與野生株C500相比無明顯變化,液體培養(yǎng)缺失株C500?rfaJ易發(fā)生自凝集沉淀現(xiàn)象。與親本株C500相比,缺失株LPS結(jié)構(gòu)因O抗原缺失而不再完整,細(xì)菌由光滑型變?yōu)榇植谛汀500?rfaJ免疫后的小鼠血清不與親本株C500發(fā)生凝集,能夠區(qū)分感染動(dòng)物和免疫動(dòng)物的血清。缺失株C500?rfaJ感染豬空腸上皮細(xì)胞IPEC-J2后,缺失株C500?rfaJ對細(xì)胞的黏附和侵染能力有明顯下降(P0.01),其在細(xì)胞內(nèi)增殖能力無顯著變化。熒光定量PCR方法檢測C500?rfaJ刺激細(xì)胞后細(xì)胞炎性因子mRNA表達(dá)水平,結(jié)果顯示,與親本株C500感染細(xì)胞組相比,TNF-α、IL-4與IL-6表達(dá)水平明顯下降。2.鼠傷寒沙門菌rfaJ基因缺失株的構(gòu)建及其生物學(xué)特性研究以鼠傷寒沙門菌D6為研究對象,構(gòu)建了 D6?rfaJ基因缺失株及其回復(fù)株D6?rfaJ::rfaJ。鼠傷寒沙門菌D6?rfaJ基因缺失株生物特性與豬霍亂沙門菌缺失株C500?ArfaJ的生物特性基本一致。缺失株D6?rfaJ生長速度與野生株相比無明顯變化,液體培養(yǎng)過程中缺失株發(fā)生自凝集沉淀;與其親本株D6相比較,D6?rfaJ的LPS結(jié)構(gòu)因O抗原缺失不再完整,細(xì)菌由光滑型變?yōu)榇植谛?D6?rfaJ免疫后的小鼠血清不與其親本株D6發(fā)生凝集。然而,有些生物學(xué)特性發(fā)生了改變,多項(xiàng)生化指標(biāo)發(fā)生改變,缺失株運(yùn)動(dòng)能力下降。以缺失株D6?rfaJ和親本株D6分別感染豬空腸上皮細(xì)胞IPEC-J2后發(fā)現(xiàn),缺失株D6?rfaJ對細(xì)胞的黏附和侵染能力有明顯下降,但增殖能力無特別明顯變化,并在感染8h后缺失株的增殖能力超過親本株D6;以BALB/c為動(dòng)物模型,口服途徑免疫6周齡小鼠,間隔2周,再次免疫,2周后以口服途徑攻毒,對D6?rfaJ進(jìn)行了免疫保護(hù)效力評價(jià),結(jié)果顯示,血清中抗體水平在14d時(shí)達(dá)到較高水平,并且小鼠經(jīng)2次免疫后兩周,能夠?qū)Ω叨玖闟L1344提供80%的免疫保護(hù);缺失株D6?rfaJ在體內(nèi)臟器和糞便中的帶菌時(shí)間低于親本株D6在體內(nèi)存在時(shí)間;口服細(xì)菌后,相比較親本株D6,缺失株感染組小鼠臟器的病理切片無明顯病灶。綜上所述,D6?rfaJ不僅具有良好的安全性,同時(shí)能提供良好的免疫保護(hù)力,為鼠傷寒沙門菌DIVA疫苗設(shè)計(jì)奠定重要的基礎(chǔ)。
[Abstract]:Salmonella typhimurium C500 strain has been used as one of the most common serotypes of Salmonella . It has been proved that the vaccine is one of the most common serotypes of Salmonella . It has been proved that the vaccine is one of the most common serotypes of Salmonella . It has been proved that the vaccine is one of the most important food - borne pathogens . The rfaJ gene deletion strain of Salmonella typhimurium strain C500 脳 rfaJ was constructed and its biological characteristics were evaluated . The results showed that the growth rate of rfaJ gene deleted strain C500 脳 rfaJ was significantly decreased compared with the parent strain C500 ? rfaJ . In conclusion , D6 ? rfaJ not only has good safety , but also provides good immune protection force , which lays an important foundation for the design of DIVA vaccine for Salmonella typhimurium .

【學(xué)位授予單位】：揚(yáng)州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：S852.61

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