本文選題：帕金森　切入點(diǎn)：Sir2　出處：《桂林醫(yī)學(xué)院》2016年碩士論文

【摘要】：目的帕金森病(idiopathic Parkinson's disease,PD),簡(jiǎn)稱PD,是第二大常見(jiàn)的中樞神經(jīng)系統(tǒng)退行性疾病,近幾十年的研究表明,PI NK1(PTEN-induced putative kinase 1)的缺失能夠?qū)е戮�粒體形態(tài)功能異常,而線粒體的功能紊亂是PD發(fā)病的一個(gè)重要原因。Sir2(Silent information regulator 2)屬于sirtuin蛋白家族的一員,最近的研究發(fā)現(xiàn),Sir2能夠誘導(dǎo)線粒體未折疊蛋白反應(yīng)(unfolded protein response,UPRmt),改善線粒體功能。目前已經(jīng)構(gòu)建包括PD等許多神經(jīng)變性疾病轉(zhuǎn)基因果蠅模型,本研究意在探討Sir2對(duì)PD轉(zhuǎn)基因果蠅是否具有神經(jīng)保護(hù)作用及其與UPRmt的相關(guān)性。方法選用Mhc-GAL4啟動(dòng)子,利用經(jīng)典的GAL4-UAS系統(tǒng),構(gòu)建Mhc-GAL4/UAS系統(tǒng)Pink1B9 PD轉(zhuǎn)基因果蠅模型,通過(guò)遺傳干預(yù)使Si r2在Mhc-GAL4/UAS系統(tǒng)PD轉(zhuǎn)基因果蠅運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元內(nèi)過(guò)表達(dá),分別進(jìn)行飛行、翅膀異翅率統(tǒng)計(jì),ATP及mRNA水平檢測(cè)等觀察Sir2過(guò)表達(dá)對(duì)果蠅運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元變性是否具有神經(jīng)保護(hù)作用,然后通過(guò)RNA干擾(RNA interference,RNAi)技術(shù)抑制UPRmt相關(guān)基因Hsp60、GCN-2的表達(dá),構(gòu)建Sir2過(guò)表達(dá)而UPRmt抑制的雙平衡系PD轉(zhuǎn)基因果蠅,進(jìn)行飛行、翅膀異常率統(tǒng)計(jì),相關(guān)分子伴侶mRNA檢測(cè)以及蛋白免疫印跡等試驗(yàn),觀察Sir2過(guò)表達(dá)對(duì)抑制果蠅運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元變性的作用,以及驗(yàn)證這種作用是否與UPRmt相關(guān)。結(jié)果成功構(gòu)建Mhc-GAL4/UAS系統(tǒng)Pink1B9 PD轉(zhuǎn)基因果蠅模型、Sir2過(guò)表達(dá)的PD轉(zhuǎn)基因果蠅模型以及UPRmt抑制而Sir2過(guò)表達(dá)的雙平衡系PD轉(zhuǎn)基因果蠅模型。Sir2過(guò)表達(dá)抑制了PD轉(zhuǎn)基因果蠅運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元變性,飛行能力得到改善,翅膀異常率下降,ATP含量升高,顯著改善了果蠅運(yùn)動(dòng)能力,而在UPRmt被抑制后,Sir2的保護(hù)作用明顯減弱。結(jié)論Sir2過(guò)表達(dá)對(duì)Mhc-GAL4/UAS系統(tǒng)PD轉(zhuǎn)基因果蠅具有神經(jīng)保護(hù)作用,而這種神經(jīng)保護(hù)作用與UPRmt相關(guān)。
[Abstract]:Objective Parkinson's disease (PD) is the second most common degenerative disease of the central nervous system (CNS). Recent studies have shown that the absence of Pi NK1(PTEN-induced putative kinase 1 can lead to abnormal morphology and function of mitochondria.The dysfunction of mitochondria is an important cause of PD. Sir2Silent information regulator 2) is a member of sirtuin protein family. Recent studies have found that Sir2 can induce mitochondrial unfolded protein response to UPRmt2 and improve mitochondrial function.A number of transgenic Drosophila models including PD and other neurodegenerative diseases have been constructed. The purpose of this study was to investigate the neuroprotective effect of Sir2 on PD transgenic Drosophila and its correlation with UPRmt.Methods Mhc-GAL4 promoter was used to construct the Mhc-GAL4/UAS system Pink1B9 PD transgenic Drosophila model by using the classical GAL4-UAS system. Through genetic intervention, SiR2 was overexpressed in the motoneurons of Mhc-GAL4/UAS PD transgenic Drosophila melanogaster.The effects of Sir2 overexpression on the degeneration of motor neurons in Drosophila melanogaster were observed by the statistics of wing heterodyne rate, ATP and mRNA levels. Then, the expression of UPRmt related gene Hsp60GCN-2 was inhibited by RNA interference RNA interference (RNAi) technique.To construct a double balanced line of transgenic Drosophila, PD, which was overexpressed by Sir2 and inhibited by UPRmt, flight, wing abnormality rate, molecular chaperone mRNA detection and Western blotting were detected.To observe the effect of Sir2 overexpression on inhibiting degeneration of motor neurons in Drosophila melanogaster and to verify whether this effect is related to UPRmt.Results the Mhc-GAL4/UAS system Pink1B9 PD transgenic Drosophila model was successfully constructed, and the PD transgenic Drosophila model with UPRmt inhibition and Sir2 overexpression was successfully constructed. Sir2 overexpression inhibited the motor neuron degeneration of PD transgenic Drosophila.The flight ability was improved, the wing abnormality rate decreased and the ATP content increased, which significantly improved the motor ability of Drosophila melanogaster, but the protective effect of Sir2 was obviously weakened after UPRmt was inhibited.Conclusion overexpression of Sir2 has a neuroprotective effect on Mhc-GAL4/UAS PD transgenic Drosophila, and this neuroprotective effect is related to UPRmt.
【學(xué)位授予單位】：桂林醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R742.5

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本文編號(hào)：1717193