發(fā)布時(shí)間：2018-03-31 19:20

  本文選題：水貂　切入點(diǎn)：白介素-　出處：《中國畜牧獸醫(yī)》2017年01期

【摘要】：為了獲得高純度的白細(xì)胞介素-4(IL-4)蛋白,對分離得到的水貂外周血淋巴細(xì)胞經(jīng)植物血凝素(PHA)誘導(dǎo)后,提取淋巴細(xì)胞總RNA,根據(jù)GenBank中登錄的雪貂IL-4基因序列,設(shè)計(jì)并合成特異性引物,通過RT-PCR擴(kuò)增獲得了水貂IL-4基因序列全長399bp,編碼132個(gè)氨基酸,與雪貂氨基酸序列同源性高達(dá)99.2%,與熊貓、犬同源性均為90.0%。將編碼成熟蛋白基因構(gòu)建到原核表達(dá)載體pProEX-HTb,IPTG誘導(dǎo)后,SDS-PAGE及Western blotting結(jié)果顯示,IL-4表達(dá)產(chǎn)物為15ku的包涵體蛋白。通過His-Trap HP親和層析預(yù)裝柱變性、復(fù)性洗脫可獲得高純度的重組IL-4蛋白。本試驗(yàn)為水貂IL-4基因的進(jìn)一步研究奠定了基礎(chǔ)。
[Abstract]:In order to obtain high purity interleukin-4 (IL-4) protein, the peripheral blood lymphocytes of mink were induced by phytohemagglutinin (GenBank). Specific primers were designed and synthesized according to the sequence of ferret IL-4 gene registered in GenBank. The full-length mink IL-4 gene was amplified by RT-PCR, encoding 132 amino acids, with 99.2 amino acid sequence homology with panda. The protein encoding mature protein gene was constructed into prokaryotic expression vector pProEX-HTbTG-induced by SDS-PAGE and Western blotting. The results of SDS-PAGE and Western blotting showed that the expression product of IL-4 was the inclusion body protein of 15ku. The precolumn denaturation was performed by His-Trap HP affinity chromatography. High purity recombinant IL-4 protein was obtained by renaturation and elution, which laid a foundation for further study of mink IL-4 gene.
【作者單位】： 吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科學(xué)技術(shù)學(xué)院;中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院特產(chǎn)研究所;
【基金】：吉林省科技發(fā)展計(jì)劃項(xiàng)目(20140520172JH);吉林省科技發(fā)展計(jì)劃項(xiàng)目(20140307002NY、20140204072NY)
【分類號】：S865.22;Q78

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本文編號：1692102