本文選題：花生　切入點：愈傷組織　出處：《鄭州大學》2016年碩士論文

【摘要】：本研究選用花生品種遠雜9307、冀甜1號、羅漢果、花37、白沙1016的上胚軸為外植體,對愈傷組織誘導和再生體系進行研究,通過比較不同預培養(yǎng)時間、不同激素配比、不同基因型的誘導愈傷差異確立適宜花生上胚軸愈傷組織誘導的最佳培養(yǎng)基。分別從體細胞胚發(fā)生途徑和器官間接發(fā)生途徑探索花生上胚軸離體再生的最佳途徑。確立最適宜的培養(yǎng)條件進行19種不同花生品種篩選。在優(yōu)化的再生體系基礎上進行農桿菌介導的遺傳轉化。遺傳轉化方面,對農桿菌介導的遺傳轉化條件進行優(yōu)化,分別從Km篩選濃度,受體材料、侵染時間、共培養(yǎng)時間完善轉化流程,將花生Δ9-硬脂酰-ACP脫氫酶基因啟動子AhSAD轉化不同花生品種的受體材料,獲得陽性植株,主要研究結果如下:(1)預培養(yǎng)時間不同,愈傷組織狀態(tài)存在明顯差異,預培養(yǎng)0d的上胚軸易形成胚性愈傷,預培養(yǎng)7d的上胚軸狀態(tài)優(yōu)于3d和10d。(2)確定MSB5+Pic3mg/L為最適宜誘導培養(yǎng)基,胚性愈傷誘導率最高可達60%以上,該類培養(yǎng)基適宜本研究中多數(shù)花生品種的愈傷誘導,并可進行多次繼代培養(yǎng)得到重復性體胚發(fā)生培養(yǎng)物。MSB5+Pic3mg/L+Gln1g/L(+)AgNO3(2mg/L)為最佳繼代培養(yǎng)基。(3)愈傷組織進一步誘導體細胞胚發(fā)生的最佳培養(yǎng)基為MS+0.4mg/L6-BA+0.1mg/LNAA,成苗率最高為46.77%。繼代過程先在6-BA0.4mg/L+NAA0.1mg/L再生,交替使用MS+6-BA3.0mg/L+NAA 0.5mg/L成苗狀況較好;愈傷組織誘導不定芽的最佳培養(yǎng)基為MS+TDZ0.2mg/L+6-BA3.0mg/L+NAA0.5mg/L,可誘導出不定芽且分化率最高為42%。(4)不同基因型的花生品種在相同的培養(yǎng)基中出現(xiàn)誘導和再生差異,9048,9102出愈率在70%-80%之間,9020,9092,9110出愈率為60%-70%,9059出愈率最低僅為16%。9099,9097再生率在40%-50%之間,9036,9093次之。(5)最終確定胚性愈傷組織和無菌苗上胚軸作為受體材料時,卡那霉素篩選濃度為80mg/L和100mg/L,兩者侵染時間在10min時褐化率最低,轉化率最高。胚性愈傷共培養(yǎng)2d時,抗卡那霉素的抗性芽數(shù)最多;無菌苗的上胚軸共培養(yǎng)3d時,抗性愈傷誘導率最高。(6)經(jīng)過卡那霉素篩選,獲得36抗性植株,其中7株經(jīng)GUS組織活性檢測和PCR檢測鑒定為陽性植株。
[Abstract]:In this study, the epicotyl of peanut varieties Yuanza 9307, Ji Tian 1, Luohanguo, Flower 37 and Baisha 1016 were used as explants to study callus induction and regeneration system. The optimum medium for callus induction of peanut epicotyl was established by different genotypic callus induction. The best way of regeneration of peanut epicotyl in vitro was explored from somatic embryogenesis pathway and organ indirect pathway respectively. To establish the most suitable culture conditions for screening 19 different peanut varieties, and to carry out Agrobacterium-mediated genetic transformation on the basis of optimized regeneration system. The conditions of genetic transformation mediated by Agrobacterium tumefaciens were optimized, and the transformation process was improved by screening concentration, receptor material, infection time and co-culture time from km, respectively. Peanut 螖 9-stearyl ACP dehydrogenase gene promoter AhSAD was transformed into different peanut varieties to obtain positive plants. The main results were as follows: 1) the callus status was significantly different with different pre-culture time. The embryogenic callus was easily formed on the epicotyl of precultured for 0 d, and the state of the epicotyl of precultured 7 days was better than that of 3 d and 10 d). MSB5 Pic3mg/L was the most suitable medium for induction, and the highest rate of embryogenic callus induction could be more than 60%. The medium was suitable for callus induction of most peanut varieties in this study. The best medium for further induction of embryogenesis from callus was MS 0.4mg/L6-BA 0.1 mg / L LNAA, and the highest seedling rate was 46.77%, and the optimum medium for inducing embryogenesis was MS 0.4mg/L6-BA 0.1 mg / L LNAA, and the reproducible somatic embryogenesis culture medium .MSB5 Pic3mg/L Gln1g-1 / L (Agno _ 3 / L _ 2 mg / L) was the best subculture medium for further induction of embryogenesis of somatic cells by MS 0.4mg/L6-BA 0.1 mg 路L ~ (NAA), and the highest plantlet rate was 46.77%. Cheng first regenerates in 6-BA0.4mg/L NAA0.1mg/L, Ms 6-BA3.0mg/L NAA 0.5mg/L was used alternately in good condition. The best medium for inducing adventitious buds was MS TDZ0.2mg/L 6-BA3.0mg/L NAA 0.5 mg / L, which could induce adventitious buds and the highest differentiation rate was 42%.) the difference of induction and regeneration between different genotypes of peanut cultivars in the same medium was between 70% and 80%. The recovery rate of 9020 / 9092 / 9110 was 60-70 / 9059 and the lowest was 160.909/ 9097 / 9097. The regeneration rate was between 40- 50% and 9036,9093 / 9093, respectively.) finally, when the embryogenic callus and the aseptocotyl of the sterile seedlings were used as the recipient materials, The screening concentration of kanamycin was 80mg/L and 100mg / L, the infection time was the lowest and the transformation rate was the highest in 10min. The number of resistant buds of kanamycin was the most when the embryogenic callus co-cultured for 2 days, and the number of resistant buds was the highest when the epicotyl of sterile plantlets was co-cultured for 3 days. The resistant callus induction rate was the highest, and 36 resistant plants were obtained by kanamycin screening. Seven of them were identified as positive plants by GUS tissue activity test and PCR assay.
【學位授予單位】：鄭州大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：S565.2

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