本文選題：脊髓損傷　切入點(diǎn)：血紅素氧化酶　出處：《解剖學(xué)報》2017年02期

【摘要】：目的應(yīng)用RNA-Seq技術(shù)分析脊髓損傷后不同階段基因表達(dá)差異情況。方法使用IH脊髓打擊儀制備脊髓損傷模型,SD大鼠48只隨機(jī)分成兩組,假手術(shù)組和實驗組,實驗組分別于損傷后1d、4d和7d取材。運(yùn)用RNA-Seq技術(shù)篩選脊髓損傷后不同時間點(diǎn)的差異表達(dá)基因,對差異基因進(jìn)行表達(dá)模式分析,功能注釋,通路分析等,篩選出血紅素氧化酶1(Hmox1)等感興趣基因進(jìn)行mRNA和蛋白水平的驗證及功能分析。結(jié)果 RNA-Seq結(jié)果表明,與假手術(shù)組相比,脊髓損傷后1d、4d和7d發(fā)生顯著變化的基因分別有944、1362和1421個。上述差異基因在損傷后不同時間點(diǎn)的變化趨勢大致可分為8種形式。Real-time PCR結(jié)果顯示,Hmox1、尿激酶型纖溶酶原激活劑(Plau)、纖溶酶原激活物抑制劑(Serpine1)和中性粒細(xì)胞胞質(zhì)因子(Ncf2)的表達(dá)變化與RNA-Seq測序結(jié)果基本一致。Western blotting結(jié)果顯示,脊髓損傷后Hmox1的蛋白表達(dá)變化趨勢與核酸水平一致;免疫組織化學(xué)結(jié)果顯示,損傷之后Hmox1主要表達(dá)于脊髓組織的神經(jīng)元中。結(jié)論 RNA-Seq技術(shù)能高效分析脊髓損傷后的差異基因,從大量差異基因中篩選出感興趣基因的驗證和功能分析為闡述脊髓損傷的分子機(jī)制提供了部分資料。
[Abstract]:Objective to analyze the difference of gene expression in different stages of spinal cord injury by RNA-Seq. Methods Forty-eight Spinal Cord injury (sci) rats were randomly divided into two groups: sham operation group and experimental group. The RNA-Seq technique was used to screen the differentially expressed genes at different time points after spinal cord injury, and the expression pattern, functional annotation and pathway analysis of the differentially expressed genes were analyzed. Heme oxygenase 1 (Hmox1) and other interested genes were screened for mRNA and protein level verification and functional analysis. Results RNA-Seq results showed that, compared with sham operation group, The number of genes significantly changed at 4 and 7 days after spinal cord injury was 944, 1362 and 1421, respectively. The changes of these genes at different time points after spinal cord injury could be roughly divided into 8 forms. Real-time PCR results showed that Hmox1, urokinase plasminogen excimer and urokinase plasminogen exciter. The expression changes of Plaun, plasminogen activator inhibitor Serpine 1 and neutrophil cytoplasmic factor ncf2) were similar to those of RNA-Seq sequencing. Western blotting analysis showed that the expression of Plaun, plasminogen activator inhibitor, and neutrophil cytoplasmic factor (Ncf2) were similar to those of RNA-Seq sequencing. The change trend of Hmox1 protein expression was consistent with the nucleic acid level after spinal cord injury, the immunohistochemical results showed that Hmox1 was mainly expressed in neurons of spinal cord tissue after injury. Conclusion RNA-Seq technique can efficiently analyze the differential genes after spinal cord injury. The identification and functional analysis of genes of interest selected from a large number of differentially expressed genes provide some information for elucidating the molecular mechanism of spinal cord injury.
【作者單位】： 南通大學(xué)醫(yī)學(xué)院組織學(xué)與胚胎學(xué)系;南通大學(xué)附屬醫(yī)院生殖醫(yī)學(xué)中心;濟(jì)寧市第一人民醫(yī)院生殖醫(yī)學(xué)科;江南大學(xué)無錫醫(yī)學(xué)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院;
【基金】：國家自然科學(xué)基金(81271721,81200828,81501610) 江蘇高校優(yōu)勢學(xué)科建設(shè)工程資助項目
【分類號】：R651.2

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本文編號：1667978