本文選題：DKK基因　切入點(diǎn)：啟動(dòng)子　出處：《畜牧獸醫(yī)學(xué)報(bào)》2017年06期

【摘要】：旨在初步探索DKK1基因轉(zhuǎn)錄調(diào)控機(jī)制,本研究利用啟動(dòng)子在線預(yù)測(cè)軟件分析了該基因啟動(dòng)子區(qū)序列特征,根據(jù)Ensembl數(shù)據(jù)庫(kù)已公布的豬DKK1基因的5′側(cè)翼區(qū)序列,設(shè)計(jì)特異性PCR引物進(jìn)行擴(kuò)增、測(cè)序,進(jìn)而構(gòu)建啟動(dòng)子區(qū)不同缺失片段的pGL3-DKK1雙熒光素酶表達(dá)載體,分別轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞和Hela細(xì)胞,并進(jìn)行雙熒光素酶報(bào)告基因檢測(cè)。結(jié)果顯示,DKK1基因啟動(dòng)子中含有1個(gè)TATA-box、多種轉(zhuǎn)錄因子和1個(gè)CpG島;DKK1基因啟動(dòng)子對(duì)239T細(xì)胞具有偏好性,其中p-1 679/+292bp啟動(dòng)子片段活性最高,且顯著高于其他缺失片段(P0.01)。-953~-1 679bp為核心啟動(dòng)子區(qū)域,-586~-953bp區(qū)域可能存在負(fù)調(diào)控元件,在-953~-1 679bp區(qū)域可能存在正調(diào)控元件。本試驗(yàn)通過對(duì)DKK1基因進(jìn)行生物信息學(xué)分析并結(jié)合不同長(zhǎng)度啟動(dòng)子片段雙報(bào)告基因活性檢測(cè),證實(shí)了DKK1基因的5′側(cè)翼區(qū)序列具有啟動(dòng)子轉(zhuǎn)錄活性,并初步確定了該基因的啟動(dòng)子區(qū)域,找到了啟動(dòng)子的核心區(qū)域和主要調(diào)控區(qū)域,為進(jìn)一步研究DKK1基因轉(zhuǎn)錄調(diào)控機(jī)制奠定基礎(chǔ)。
[Abstract]:In order to explore the transcriptional regulation mechanism of DKK1 gene, this study analyzed the sequence characteristics of the promoter region of the gene by using the promoter on-line prediction software. According to the 5'flanking region sequence of porcine DKK1 gene published in Ensembl database, the sequence of 5'flanking region of porcine DKK1 gene was analyzed. Specific PCR primers were designed for amplification and sequencing, and then pGL3-DKK1 double luciferase expression vectors with different deletion fragments in promoter region were constructed and transfected into 293T cells and Hela cells, respectively. The double luciferase reporter gene was detected. The results showed that there was a TATA-box in the promoter of DKK1 gene, and many transcription factors and one promoter of DKK1 gene of CpG island had preference to 239T cells, among which the activity of p16679 / 292bp promoter was the highest. Moreover, it was significantly higher than that of other deletion fragments, P0.01G. -953 679bp as the core promoter region, and there might be negative regulatory elements in the region of -586r-953bp. There may be positive regulatory elements in the region of -953 ~ (-1) 679bp. The bioinformatics analysis of the DKK1 gene and the detection of the activity of the double reporter gene with different length promoter fragments were carried out in this study. It was confirmed that the 5'flanking region of the DKK1 gene had promoter transcriptional activity, and the promoter region of the gene was preliminarily identified, and the core region and the main regulatory region of the promoter were found. It will lay a foundation for further study on the transcriptional regulation mechanism of DKK1 gene.
【作者單位】： 河北農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院;國(guó)家北方山區(qū)農(nóng)業(yè)工程技術(shù)研究中心;河北省山區(qū)農(nóng)業(yè)工程技術(shù)研究中心;河北工程大學(xué)生命科學(xué)與食品工程學(xué)院;唐山市畜牧工作站;安平縣畜牧獸醫(yī)站;邢臺(tái)市畜牧站;
【基金】：河北省現(xiàn)代農(nóng)業(yè)產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系專項(xiàng)(HBCT2013070202)
【分類號(hào)】：Q78;S828

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