本文選題：急性髓細(xì)胞白血病　切入點(diǎn)：SENEX　出處：《安徽醫(yī)科大學(xué)》2017年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：背景急性髓細(xì)胞白血病(acute myeloid Leukemia,AML)是成人白血病中最常見的一種類型,起源于髓系干/祖細(xì)胞突變引起的血液惡性克隆性疾病,它發(fā)病所涉及的機(jī)制非常復(fù)雜且尚未明確。盡管近年來診療技術(shù)發(fā)展迅速,然而仍有相當(dāng)一部分患者面臨復(fù)發(fā)或耐藥等治療難題,目前AML的5年總生存率(overall survival,OS)僅為30%-40%,而復(fù)發(fā)和難治患者的更是低于15%。白血病細(xì)胞很難被完全清除殺死,這也造成了難治/復(fù)發(fā)的問題出現(xiàn),分析其原因,可能白血病細(xì)胞存在某種自我保護(hù)機(jī)制,促使它可以逃逸化療藥物以及免疫系統(tǒng)的殺傷。細(xì)胞衰老是細(xì)胞在受到內(nèi)外因素的壓力時(shí),進(jìn)入一種相對靜止且穩(wěn)定的狀態(tài)。隨著對衰老研究的深入,發(fā)現(xiàn)衰老不一定會(huì)走向不可逆的凋亡,應(yīng)激性衰老(stress induced premature senescence,SIPS)是由內(nèi)外壓力因素刺激下提前發(fā)生的衰老,當(dāng)壓力解除或環(huán)境發(fā)生改變后,衰老的細(xì)胞有可能會(huì)重新復(fù)蘇,進(jìn)入細(xì)胞周期。而有研究發(fā)現(xiàn)腫瘤細(xì)胞在放化療藥物等DNA損傷的因素下也會(huì)提前出現(xiàn)衰老。SENEX基因是與細(xì)胞衰老相關(guān)的抗凋亡的新基因,研究表明SENEX基因可介導(dǎo)細(xì)胞發(fā)生SIPS具有抗凋亡和免疫抑制效應(yīng)。SENEX基因的特征有利于研究臨床AML的復(fù)發(fā)以及耐藥的問題,因此針對SENEX基因參與AML疾病的發(fā)生和進(jìn)展的研究有著重要的價(jià)值。目的本課題選擇AML患者為研究對象,QRT-PCR檢測SENEX基因m RNA表達(dá)水平并分析在各個(gè)階段的AML患者(初診、復(fù)發(fā)、緩解)和正常對照組的骨髓中的表達(dá)特點(diǎn)及差異,明確SENEX基因的表達(dá)是否在AML細(xì)胞中上調(diào);并將其與AML的臨床特征相結(jié)合,探討SENEX基因的表達(dá)在AML患者中的臨床意義;體外實(shí)驗(yàn)利用AML細(xì)胞株初步探索SENEX基因在AML中是否通過啟動(dòng)衰老信號(hào)通路、抑制促凋亡基因的作用來發(fā)揮保護(hù)白血病細(xì)胞的作用。方法共收集67例已確診的AML患者的骨髓標(biāo)本,其中初診AML患者21例,骨髓緩解AML患者27例,復(fù)發(fā)的AML患者19例。同時(shí)選取12例年齡性別均相匹配的非血液腫瘤疾病的缺鐵性貧血患者作為實(shí)驗(yàn)對照組。本實(shí)驗(yàn)應(yīng)用實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測SENEX基因在21例初診AML患者(AML-ND組)、27例骨髓完全緩解的AML患者(AML-CR組)、19例骨髓復(fù)發(fā)的AML患者(AML-Relapse組)以及12例對照組的骨髓單個(gè)核細(xì)胞中的表達(dá)情況,比較該四組之間的基因表達(dá)水平的差異,并分析SENEX基因表達(dá)水平與臨床特征和療效的關(guān)聯(lián)。其次在體外實(shí)驗(yàn)中,選用細(xì)胞毒性藥物阿糖胞苷(Ara-c)刺激誘導(dǎo)AML細(xì)胞株NB4發(fā)生衰老,同時(shí)再聯(lián)合Ara-c與Si RNA共同處理NB4細(xì)胞株作為實(shí)驗(yàn)組之一,對照組選用等量的PBS處理,72小時(shí)后檢測并分析Ara-c組與PBS組的SENEX基因m RNA表達(dá)水平的差異,同時(shí)檢測并分析Ara-c組,PBS組以及Ara-c+Si RNA組這三組細(xì)胞的凋亡水平。最后利用Si RNA沉默NB4細(xì)胞株中的SENEX基因的表達(dá),檢測該組及對照組的促凋亡基因(p53、Caspase-3)表達(dá)水平,并分析與SENEX基因的相關(guān)性。結(jié)果1.SENEX基因表達(dá)水平與AML疾病的進(jìn)展有明顯的相關(guān)性。AML-ND組和AML-Relapse組SENEX基因表達(dá)水平均明顯高于正常對照組,同時(shí)AML-ND組SENEX基因表達(dá)水平明顯高于AML-CR組。分析各亞型之間的AML中SEMEX基因的表達(dá),以AML-M3的SENEX基因表達(dá)水平最高。AML患者SENEX基因m RNA表達(dá)水平與骨髓原始細(xì)胞比例存在正相關(guān)性。此外分析AML初診患者的臨床特征發(fā)現(xiàn)一次化療緩解的患者(n=14)的SENEX基因表達(dá)顯著低于一次化療未緩解的患者(n=7),并且一次化療未緩解的患者預(yù)后均較差。2.體外實(shí)驗(yàn)中,Ara-c刺激組的細(xì)胞中SENEX基因表達(dá)水平顯著高于PBS對照組,且Ara-c刺激組的細(xì)胞基本處于早期凋亡階段。而Ara-c+Si RNA組早期凋亡階段的細(xì)胞較Ara-c刺激組顯著降低。3.Si RNA-SENEX轉(zhuǎn)染后,結(jié)果發(fā)現(xiàn)沉默SENEX基因的表達(dá)后會(huì)上調(diào)促凋亡基因(p53、Caspase-3)的表達(dá)。結(jié)論SENEX基因的異常表達(dá)與AML的發(fā)生發(fā)展以及預(yù)后密切相關(guān)。SENEX涉及AML細(xì)胞的凋亡途徑,它可能通過抑制促凋亡基因的表達(dá)來拮抗白血病細(xì)胞凋亡。
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【學(xué)位授予單位】：安徽醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R733.71

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：1651014