油茶脂肪酸β氧化多功能蛋白基因的克隆與原核表達
發(fā)布時間:2018-03-16 13:27
本文選題:油茶 切入點:多功能蛋白 出處:《分子植物育種》2016年06期 論文類型:期刊論文
【摘要】:油茶是中國重要的木本食用油料樹種,在油茶種子的發(fā)育過程中,涉及到一系列調(diào)控代謝過程的酶和基因,脂肪酸β氧化多功能蛋白(MFP)是β氧化系統(tǒng)上的一類酶,它完成催化β-氧化途徑中的水合與脫氫過程。本研究以國審油茶品種‘華碩’種子為材料,在已構(gòu)建的轉(zhuǎn)錄組和表達譜數(shù)據(jù)庫的基礎(chǔ)之上,采用RACE技術(shù),克隆到油茶脂肪酸β氧化多功能蛋白基因的cDNA全長序列,命名為CoMFP(Gen Bank登錄號為KJ910342)。序列分析表明,該基因cDNA全長為2 541 bp,含有2 178 bp的開放讀碼框,編碼725個氨基酸,分子量為79.033 3 kD,理論等電點pI為9.11,具有六個比較明顯的跨膜區(qū),不僅存有反式烯酰CoA水合酶(ECH)信號序列、3羥酰Co A脫氫酶(HCDH)信號序列、ECH基序和磷酸結(jié)合基序,也具有相當(dāng)保守的鹽橋、活性位點及五個亞結(jié)構(gòu)域。成功地構(gòu)建了原核表達載體并在宿主細(xì)胞BL21(DE3)上成功誘導(dǎo)表達,獲得表觀分子量約為79 kD的相應(yīng)目的蛋白。
[Abstract]:Camellia oleifera is an important woody edible oil species in China. During the development of Camellia oleifera seeds, it involves a series of enzymes and genes that regulate the metabolic process. It completed the hydration and dehydrogenation process in the catalytic 尾 -oxidation pathway. In this study, the seeds of Asus, a Chinese Camellia oleifera cultivar, were used as materials, on the basis of the constructed transcriptome and expression profile database, RACE technique was used. The full-length cDNA sequence of the fatty acid 尾 oxidation multifunctional protein gene of Camellia oleifera was cloned and named as CoMFP(Gen Bank accession number KJ910342. The sequence analysis showed that the cDNA length of the gene was 2 541 BP, containing an open reading frame of 2 178 BP and encoding 725 amino acids. The molecular weight is 79.033 3 KD, and the theoretical isoelectric point Pi is 9.11. There are six obvious transmembrane regions. Not only are there three hydroxyl CoA dehydrogenase (HCDH) signal sequences, but also the phosphoric acid binding motifs. The prokaryotic expression vector was successfully constructed and induced on the host cell BL21DDE3. The corresponding target protein with an apparent molecular weight of about 79 KD was obtained.
【作者單位】: 中南林業(yè)科技大學(xué)經(jīng)濟林培育與保護教育部重點實驗室經(jīng)濟林育種與栽培國家林業(yè)局重點實驗室;國家林業(yè)局桉樹研究開發(fā)中心;廣西林業(yè)科學(xué)研究院;華中師范大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院;
【基金】:國家自然科學(xué)基金(31070603) 湖南省自然科學(xué)基金(14JJ2104) 中南林業(yè)科技大學(xué)青年基金重點項目(QJ2011008A)共同資助
【分類號】:S794.4
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,本文編號:1620117
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