本文選題：TRIM　切入點：克隆　出處：《水生生物學報》2017年04期 　論文類型：期刊論文

【摘要】：TRIM(Tripartite-motif protein)家族是機體先天性免疫的重要成員,參與細胞增殖分化、細胞凋亡、腫瘤抑制、抗病毒等過程。為了進一步探究TRIM蛋白在魚類免疫中的作用,實驗利用PCR方法克隆了草魚TRIM32基因的編碼區(qū)全長,共1980 bp,編碼660個氨基酸。草魚TRIM32具有TRIM家族典型的3個結構域,與斑馬魚TRIM32的核苷酸序列同源性較高,遺傳進化分析也聚為一支。間接免疫熒光、Western-blotting檢測結果顯示草魚TRIM32在EPC細胞中成功表達,主要以點狀分布在細胞質(zhì)中,細胞核中表達量較少;組織分布分析表明TRIM32在被檢測的11個組織中均有表達,其中在頭腎組織中的表達量明顯高于其他組織;不同胚胎發(fā)育時期的表達分析進一步表明,TRIM32在受精卵時期、卵裂期和囊胚期的表達量顯著高于其他時期(P0.05),隨后表達量下降,直到出膜后表達量再次顯著性升高。此外,雙熒光素酶檢測系統(tǒng)顯示TRIM32能夠激活NF-κB信號通路,誘導下游的炎癥反應。結果顯示,草魚TRIM32廣泛分布于魚體內(nèi),并參與機體的天然免疫反應,對于抵抗病原體的入侵具有重要作用。
[Abstract]:TRIM(Tripartite-motif protein family is an important member of innate immune system. It is involved in cell proliferation and differentiation, apoptosis, tumor inhibition, antivirus and so on. In order to further explore the role of TRIM protein in fish immunity, The coding region of the TRIM32 gene of grass carp was cloned by PCR method, encoding 660 amino acids. The TRIM32 of grass carp has three typical domains of TRIM family, and has high homology with TRIM32 nucleotide sequence of zebrafish. The results of indirect immunofluorescence Western-blotting analysis showed that grass carp TRIM32 was successfully expressed in EPC cells, mainly in the cytoplasm with a small amount of expression in the nucleus. Tissue distribution analysis showed that the expression of TRIM32 in 11 tissues was significantly higher than that in other tissues, and the expression of TRIM32 in fertilized eggs was further demonstrated at different embryonic stages. The expression level in cleavage stage and blastocyst stage was significantly higher than that in other stages, and then decreased, and then increased again after membrane exudation. In addition, the double luciferase detection system showed that TRIM32 could activate NF- 魏 B signaling pathway. The results showed that grass carp TRIM32 was widely distributed in fish and participated in the innate immune response, which played an important role in resisting the invasion of pathogens.
【作者單位】： 華中農(nóng)業(yè)大學水產(chǎn)學院水生動物醫(yī)學系;中國水產(chǎn)科學研究院長江水產(chǎn)研究所;淡水水產(chǎn)健康養(yǎng)殖湖北省協(xié)同創(chuàng)新中心;池塘健康養(yǎng)殖湖北省工程實驗室;
【基金】：湖北省科技支撐計劃項目(2015BBA234)資助~~
【分類號】：S917.4

【共引文獻】

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【二級參考文獻】

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本文編號：1617872