本文選題：miRNA　切入點(diǎn)：NDFMS　出處：《南京醫(yī)科大學(xué)》2016年博士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：巨大兒是指出生體重超過4000g的足月活產(chǎn)新生兒。隨著人們生活水平的不斷提高,巨大兒的發(fā)生率呈明顯上升趨勢。巨大兒分娩不僅會(huì)增加圍產(chǎn)兒窒息死亡或肩難產(chǎn)的風(fēng)險(xiǎn),還會(huì)增加剖宮產(chǎn)的幾率以及母體損傷,如產(chǎn)程異常、大量出血、產(chǎn)傷等并發(fā)癥。此外,胎兒期的肥胖也會(huì)影響至兒童期甚至成年后,巨大兒成年后更易患心血管疾病、肥胖癥和糖尿病等代謝性疾病。巨大兒的發(fā)生雖與妊娠期糖尿病密切相關(guān),近年來隨著對妊娠期糖尿病的篩查普及以及規(guī)范化管理,糖尿病性巨大兒的發(fā)生率逐漸下降,而非糖尿病性巨大兒(Non-diabetic fetal macrosomia, NDFMS)的發(fā)生率卻呈不斷上升趨勢,其具體分子機(jī)制仍不清楚。新生兒出生體重異常帶來健康風(fēng)險(xiǎn),如何將成年疾病的預(yù)防提前是當(dāng)今衛(wèi)生領(lǐng)域內(nèi)的研究熱點(diǎn)。因此,揭示NDFMS的發(fā)病機(jī)制,尋求更有效的治療和干預(yù)手段,對提高人口素質(zhì)具有重要意義。胎盤因素是巨大兒形成的重要原因,大量研究表明,非編碼RNA調(diào)控在胎盤發(fā)生及功能維持中發(fā)揮著重要作用,MicroRNA (miRNA)表達(dá)紊亂與胎兒生長發(fā)育異常密切相關(guān)。本研究以NDFMS及自然妊娠足月單胎子代的胎盤組織為研究對象,檢測分析miRNA的表達(dá)譜,進(jìn)而通過體外培養(yǎng)滋養(yǎng)層細(xì)胞模型進(jìn)行各分子間調(diào)控的機(jī)制驗(yàn)證,探討miR-17-92基因簇在NDFMS發(fā)生中的作用及調(diào)控機(jī)制,以期為揭示NDFMS發(fā)病機(jī)理及其潛在診斷和治療的易感性生物標(biāo)志物提供理論依據(jù)。第一部分NDFMS和正常對照胎盤中miRNA表達(dá)譜分析目的篩選出NDFMS胎盤組織中差異表達(dá)的miRNA分子,獲得NDFMS和正常對照胎盤中miRNA表達(dá)譜。方法收集10例NDFMS胎盤組織和10例正常對照胎盤組織,提取RNA,應(yīng)用TaqMan(?) MicroRNA芯片篩選出NDFMS胎盤組織中差異表達(dá)的miRNA分子,采用實(shí)時(shí)定量逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(qRT-PCR)在樣本中進(jìn)行驗(yàn)證。結(jié)果miRNA芯片篩選出NDFMS和正常對照胎盤中55條miRNAs在兩個(gè)組中的表達(dá)水平差異達(dá)8倍以上,其中表達(dá)上調(diào)的有15條,表達(dá)下調(diào)的有32條,miR-17-92基因簇的6條miRNAs存在差異表達(dá)。結(jié)論1. miRNA表達(dá)譜芯片可用于分析胎盤組織miRNA表達(dá)譜；2.通過TaqMan(?) MicroRNA芯片篩選出NDFMS胎盤中表達(dá)失衡的一系列miRNA;3.miR-17-92基因簇的6條miRNAs在芯片中均存在差異表達(dá),可為下一步開展NDFMS胎盤組織miRNA的功能研究提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。第二部分miR-17-92基因簇在NDFMS發(fā)生中的作用及其調(diào)控機(jī)制目的以第一部分miRNA表達(dá)譜芯片結(jié)果為基礎(chǔ),本部分內(nèi)容主要探討miR-17-92基因簇在NDFMS中的作用及其調(diào)控機(jī)制。方法采用qRT-PCR技術(shù)檢測miRNA及其mRNA在胎盤及孕婦外周血中的表達(dá)；通過瞬時(shí)轉(zhuǎn)染技術(shù)使細(xì)胞的miR-17-92基因簇異常表達(dá)：應(yīng)用Transwell試驗(yàn)、CCK-8、EdU試驗(yàn)和流式細(xì)胞技術(shù)評(píng)價(jià)細(xì)胞生物學(xué)功能；采用生物信息學(xué)軟件miRTarBase database預(yù)測miRNA的潛在靶基因；Western blot技術(shù)檢測靶基因的蛋白表達(dá)；通過雙熒光素酶報(bào)告基因試驗(yàn)體外驗(yàn)證miR-17-92基因簇及其靶基因的結(jié)合。結(jié)果1.細(xì)胞周期信號(hào)通路是miR-17-92基因簇miRNAs調(diào)控靶基因的最主要富集通路；2.miR-17-92基因簇miRNAs在轉(zhuǎn)錄水平可調(diào)控MAD4、SMAD3、RBI和EP300的表達(dá),而在翻譯后的蛋白水平僅調(diào)控SMAD4和RB1的表達(dá)；3.miR-17-92基因簇]miRNAs可促進(jìn)滋養(yǎng)層細(xì)胞增殖、抑制細(xì)胞凋亡,并使細(xì)胞進(jìn)入S期過多；4.參與miRNA成熟過程的2個(gè)酶Dicer、Drosha在NDFMS的表達(dá)水平明顯高于正常對照組；5.miR-17-92基因簇miRNAs用于診斷NDFMS的受試者工作特征曲線(Receiver Operating Characteristic curve, ROC曲線)的曲線下面積為80.53%,敏感性為82.61%,特異性為69.57%。結(jié)論1.高表達(dá)的miR-17-92基因簇miRNAs可在蛋白質(zhì)水平對SMAD4、RBI基因的表達(dá)進(jìn)行調(diào)控,改變胎盤滋養(yǎng)細(xì)胞的增殖、凋亡功能,從而促進(jìn)NDFMS的發(fā)生。2.miR-17-92基因簇miRNAs組合可以作為潛在的非侵入性生物學(xué)標(biāo)志物用于NDFMS的預(yù)測診斷。
[Abstract]:宸ㄥぇ鍎挎槸鎸囧嚭鐢熶綋閲嶈秴榪，

本文編號(hào)：1617933