本文選題：乳腺癌　切入點(diǎn)：Bcap-37細(xì)胞　出處：《錦州醫(yī)科大學(xué)》2017年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：目的研究生長抑制因子5(the protein of the inhibitor of growth 5,ING5)基因過表達(dá)對人乳腺癌細(xì)胞Bcap-37細(xì)胞增殖,細(xì)胞周期阻滯和細(xì)胞凋亡、侵襲與遷移和上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)的影響,以及可能通過PI3K/AKT信號通路影響EMT。方法人乳腺癌細(xì)胞Bcap-37穩(wěn)轉(zhuǎn)p EGFP-N1-ING5真核表達(dá)載體和p EGFP-N1空載體,熒光顯微鏡檢查綠色熒光蛋白的表達(dá),實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)PCR和蛋白質(zhì)印跡方法篩選ING5過表達(dá)細(xì)胞株。Bcap-37-ING5細(xì)胞為實(shí)驗(yàn)組,Bcap-37-GFP細(xì)胞作為空載體組,Bcap-37細(xì)胞作為空白對照組。采用MTT法檢測ING5對Bcap-37細(xì)胞增殖的影響,采取流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞凋亡及周期的影響,采取細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)和Transwell實(shí)驗(yàn)來檢測Bcap-37細(xì)胞的遷移和侵襲情況,實(shí)時(shí)熒光定量PCR和蛋白質(zhì)印跡檢測ING5對乳腺癌細(xì)胞EMT相關(guān)基因E-cadherin和N-cadherin表達(dá)水平的影響。構(gòu)建裸鼠成瘤模型,采用免疫組化法檢測ING5過表達(dá)對人乳腺癌細(xì)胞在裸鼠體內(nèi)成瘤的EMT相關(guān)蛋白Ecadherin和N-cadherin的影響。采用蛋白質(zhì)印跡檢測ING5基因過表達(dá)對PI3K/AKT磷酸化水平的改變。結(jié)果人乳腺癌細(xì)胞Bcap-37經(jīng)穩(wěn)轉(zhuǎn)并篩選得到穩(wěn)定高表達(dá)綠色熒光蛋白(green fliorescent protein,GFP)標(biāo)記的ING5蛋白的Bcap-37細(xì)胞株。相比空白對照組和空載體組,ING5過表達(dá)可以降低人乳腺癌細(xì)胞Bcap-37細(xì)胞增殖率,并導(dǎo)致G2期阻滯,誘導(dǎo)人乳腺癌細(xì)胞Bcap-37發(fā)生細(xì)胞凋亡率增加,抑制人乳腺癌細(xì)胞Bcap-37的侵襲與遷移能力,并逆轉(zhuǎn)EMT表型(P0.05),這可能是通過抑制PI3K/AKT信號通路的磷酸化水平從而逆轉(zhuǎn)EMT進(jìn)程。結(jié)論ING5基因表達(dá)與乳腺癌發(fā)生、轉(zhuǎn)移和分化緊密相關(guān),ING5過表達(dá)對人乳腺癌細(xì)胞Bcap-37控制增殖、發(fā)生G2期阻滯、誘導(dǎo)凋亡、抑制侵襲與遷移,并可能通過抑制PI3K/AKT途徑抑制乳腺癌細(xì)胞中EMT進(jìn)程,逆轉(zhuǎn)腫瘤的惡性表型,可作為乳腺癌的基因治療和預(yù)后的分子靶標(biāo)。
[Abstract]:Objective to investigate the effects of overexpression of the protein of the inhibitor of growth 5 gene on proliferation, cell cycle arrest and apoptosis, invasion and migration and epithelial-mesenchymal transition of human breast cancer cell line Bcap-37. Methods Human breast cancer cell line Bcap-37 was stably transformed into p EGFP-N1-ING5 eukaryotic expression vector and p EGFP-N1 empty vector, and the expression of green fluorescent protein was detected by fluorescence microscope. Real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction (PCR) and Western blot were used to screen ING5 overexpression cell line .Bcap-37-ING5 cells as blank control group. MTT assay was used to detect the effect of ING5 on the proliferation of Bcap-37 cells. Flow cytometry was used to detect cell apoptosis and cell cycle, cell scratch test and Transwell assay were used to detect the migration and invasion of Bcap-37 cells. The effect of ING5 on the expression of EMT related genes E-cadherin and N-cadherin in breast cancer cells was detected by real-time fluorescence quantitative PCR and Western blot. The effect of ING5 overexpression on EMT associated protein Ecadherin and N-cadherin in human breast cancer cells in nude mice was detected by immunohistochemical method. Western blotting was used to detect the changes of PI3K/AKT phosphorylation level in human breast cancer cells. Bcap-37 was stably transformed into Bcap-37 cell line which was stably expressed green fliorescent protein (GFP). Overexpression of ING5 could reduce the proliferation rate of human breast cancer Bcap-37 cells compared with blank control group and empty vector group. It also resulted in G2 arrest, increased apoptosis rate of human breast cancer cell Bcap-37, and inhibited the invasion and migration of human breast cancer cell Bcap-37. And reverse the EMT phenotype P0.05, which may reverse the process of EMT by inhibiting the phosphorylation level of PI3K/AKT signaling pathway. Conclusion the expression of ING5 gene is closely related to the occurrence, metastasis and differentiation of breast cancer, and the overexpression of ING5 can control the proliferation of human breast cancer cell line Bcap-37. G _ 2 arrest induces apoptosis inhibits invasion and migration and inhibits EMT progression in breast cancer cells by inhibiting PI3K/AKT pathway and reversing the malignant phenotype of breast cancer. It can be used as a molecular target for gene therapy and prognosis of breast cancer.
【學(xué)位授予單位】：錦州醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R737.9

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