發(fā)布時間：2018-03-13 20:13

  本文選題：Notch　切入點：NF-κB　出處：《中華細胞與干細胞雜志(電子版)》2016年06期 　論文類型：期刊論文

【摘要】：目的探討Notch和NF-κB信號通路在動脈粥樣硬化(AS)發(fā)病過程中的作用方式、兩者是否存在串話。方法將AS患者外周血單核細胞誘導為巨噬細胞后,分別經(jīng)Notch1-siRNA、Notch2-siRNA、Notch3-siRNA以及NC-siRNA轉(zhuǎn)染。使用RT-PCR和Western Blot法檢測轉(zhuǎn)染后各組P65、IκBα基因以及蛋白表達情況。EMSA法檢測轉(zhuǎn)染后各組NF-κB活性。免疫熒光法檢測巨噬細胞內(nèi)P65分布。兩組間資料差異比較采用t檢驗,多組間比較采用單因素方差分析。結果 RT-PCR結果顯示,siRNA轉(zhuǎn)染巨噬細胞后,Notch3-siRNA組、Notch2-siRNA組、Notch1-siRNA組中P65基因表達水平漸次降低(分別為0.709±0.007、0.557±0.031、0.114±0.014),組間差異有統(tǒng)計學意義(F=709.224,P0.001),且較空白及陰性對照組均出現(xiàn)明顯下降(P0.05),Noch1-siRNA組下降最顯著;而IκBα表達水平漸次升高(分別為1.811±0.172、3.253±0.169、5.295±0.433),組間差異有統(tǒng)計學意義(F=112.290,P0.001),并均明顯高于空白、陰性對照組(P0.05),也以Noch1-siRNA組變化最明顯。Western-Blot方法檢測所得P65、IκBα蛋白表達結果與RT-PCR結果一致。Notch-siRNA轉(zhuǎn)染后的巨噬細胞內(nèi)NF-κB活性均顯著低于空白對照組和陰性對照組,Notch1-siRNA組活性下降最顯著。巨噬細胞核內(nèi)及胞漿內(nèi)P65蛋白的熒光強度Notch1-siRNA組(21 405.20±929.91)、Notch2-siRNA組(25 987.13±911.40)、Notch3-siRNA組(28 074.67±452.16)較空白對照組(57 238.33±1 059.21)以及陰性對照組(55 844.27±1331.10)均不同程度減弱(P均0.01),且細胞核內(nèi)熒光強度較核外更低,以Notch1-siRNA組減弱最明顯(組間比較F=55.137,P0.001)。結論 AS患者巨噬細胞中Notch與NF-κB經(jīng)典通路之間存在正向調(diào)節(jié),且Notch1通路較Notch2、Notch3對NF-κB經(jīng)典通路的調(diào)節(jié)作用更顯著。
[Abstract]:Objective to investigate the role of Notch and NF- 魏 B signaling pathway in the pathogenesis of atherosclerosis. After transfection with Notch1-siRNA-Notch2-siRNA-Notch3-siRNA and NC-siRNA, the expression of P65 I 魏 B 偽 gene and protein was detected by RT-PCR and Western Blot. The activity of NF- 魏 B was detected by EMSA method. The distribution of p65 in macrophages was detected by immunofluorescence assay. T test was used to compare the difference. Results the results of RT-PCR showed that the expression of p65 gene in Notch1-siRNA group decreased gradually (0.709 鹵0.007 鹵0.557 鹵0.031 鹵0.014 鹵0.114 鹵0.014 4) after transfection of siRNA into macrophages, and there was a significant difference between the two groups in the expression of p65 gene in the Notch2-siRNA group (0.709 鹵0.007 鹵0.031 鹵0.114 鹵0.014), and there was a significant difference between the two groups in the expression of p65 gene in the ntch2-siRNA group (0.709 鹵0.007 鹵0.031 鹵0.114 鹵0.01414, respectively), and there was a significant difference between the two groups. In negative control group, there was a significant decrease in P0.05 and Noch1-siRNA. The expression level of I 魏 B 偽 increased gradually (1.811 鹵0.172 鹵3.253 鹵0.169 鹵5.295 鹵0.433), and the difference between the two groups was statistically significant. The expression of P65 I 魏 B 偽 protein in Noch1-siRNA group was the same as that in RT-PCR group. The activity of NF- 魏 B in macrophages transfected with Notch-siRNA was significantly lower than that in control group and negative control group. The fluorescence intensity of p65 protein in nucleus and cytoplasm of macrophages in Notch1-siRNA group (21 405.20 鹵929.91) and Notch2-siRNA group (25 987.13 鹵911.404.67 鹵452.16) was significantly lower than that in control group (55,238.33 鹵1 059.21) and negative control group (55 844.27 鹵1331.10) (P < 0.01). Conclusion there is a positive regulation between Notch and NF- 魏 B classic pathway in macrophages of as patients, and the effect of Notch1 pathway on NF- 魏 B classic pathway is more significant than that of Notch2ntch3.
【作者單位】： 揚州大學附屬泰州市人民醫(yī)院胸痛中心;
【基金】：泰州市社會發(fā)展基金(81570748)
【分類號】：R54

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本文編號：1607963