本文選題：FAMB基因　切入點(diǎn)：超表達(dá)　出處：《黑龍江畜牧獸醫(yī)》2017年05期 　論文類型：期刊論文

【摘要】：為了應(yīng)用基因重組技術(shù),構(gòu)建小鼠FAM134B基因慢病毒超表達(dá)和短發(fā)夾(shRNA)載體,試驗(yàn)根據(jù)Gen Bank上登錄的小鼠FAM134B基因序列設(shè)計(jì)引物,擴(kuò)增該基因開放閱讀框(ORF)序列,并克隆到酶切的FUGW載體,同時(shí)設(shè)計(jì)3對FAM134B-siRNA序列克隆到酶切的PsicoR載體,將獲得的重組質(zhì)粒與包裝質(zhì)粒(PSPA和PMD2G)共轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞包裝成病毒顆粒,感染體外培養(yǎng)的3T3-L1前體脂肪細(xì)胞,實(shí)時(shí)熒光定量PCR(q PCR)檢測FAM134B基因的超表達(dá)及干擾效果。結(jié)果表明:重組質(zhì)粒FUGW-PGC-1α-GFP及PsicoR-FAM134B-GFP測序驗(yàn)證成功,包裝后感染3T3-L1前體脂肪細(xì)胞發(fā)現(xiàn)該基因被成功超表達(dá)和干擾。說明成功構(gòu)建小鼠FAM134B慢病毒超表達(dá)和干擾載體,可為該基因在脂代謝中的作用提供重要的工具。
[Abstract]:In order to construct mouse FAM134B gene lentivirus overexpression vector and short hairpin shRNA vector by gene recombination technique, primers were designed according to the mouse FAM134B gene sequence registered on Gen Bank to amplify the open reading frame (ORF) sequence. At the same time, three pairs of FAM134B-siRNA sequences were designed to be cloned into the PsicoR vector. The recombinant plasmid was co-transfected into 293T cells into viral particles and infected with 3T3-L1 precursor adipocytes in vitro. Real-time fluorescence quantitative PCR(q PCR was used to detect the overexpression and interference of FAM134B gene. The results showed that the recombinant plasmid FUGW-PGC-1 偽 -GFP and PsicoR-FAM134B-GFP were sequenced successfully. It was found that the gene was successfully overexpressed and interfered in the preadipocytes infected with 3T3-L1 after packaging, indicating that the successful construction of mouse FAM134B lentivirus superexpression and interference vector could provide an important tool for the role of the gene in lipid metabolism.
【作者單位】： 西南民族大學(xué)生命科學(xué)與技術(shù)學(xué)院;新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院;
【基金】：國家自然科學(xué)基金項(xiàng)目(31201990) 四川省應(yīng)用基礎(chǔ)項(xiàng)目(2014JY0080)
【分類號】：Q78

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9 張U，

本文編號：1599089