發(fā)布時間：2018-03-11 12:51

  本文選題：蠟樣芽孢桿菌　切入點：膠原酶　出處：《微生物學通報》2017年04期 　論文類型：期刊論文

【摘要】：【目的】利用畢赤酵母真核表達系統(tǒng)表達蠟樣芽孢桿菌膠原酶Col R75E,尋找一種安全、穩(wěn)定的方式體外制備具有高活性的膠原酶�！痉椒ā恳韵灅友挎邨U菌R75E基因組DNA為模板,采用PCR法擴增膠原酶col R75E基因,構(gòu)建p PICZαA/col R75E重組質(zhì)粒,將該質(zhì)粒線性化后電轉(zhuǎn)化至畢赤酵母X-33菌株,誘導(dǎo)其表達并對表達條件進行優(yōu)化。將表達后的酵母發(fā)酵液上清通過硫酸銨沉淀、脫鹽處理及親和層析純化步驟獲得高純度重組Col R75E膠原酶。利用膠原酶活力測定、SDS-PAGE電泳、膠原酶譜、I型膠原蛋白及不同底物蛋白降解產(chǎn)物電泳等方法對重組膠原酶Col R75E的活性及底物特異性進行分析�！窘Y(jié)果】畢赤酵母中最佳表達重組膠原酶Col R75E的條件為p H 6.0,甲醇終濃度為2.5%,誘導(dǎo)時間72 h,誘導(dǎo)后的蛋白經(jīng)SDS-PAGE、膠原酶譜以及I型膠原蛋白降解產(chǎn)物電泳分析發(fā)現(xiàn),畢赤酵母中表達的重組膠原酶分子量符合預(yù)期,蛋白純度超過95%,具有較好的膠原蛋白水解活性并測得其比活力為4.977 U/mg。該酶對I型膠原蛋白表現(xiàn)出較好的專一性,但是對牛血清白蛋白、酪蛋白及溶菌酶蛋白沒有水解活性�！窘Y(jié)論】利用畢赤酵母真核表達系統(tǒng)能夠獲得高活性的蠟樣芽孢桿菌膠原酶Col R75E,為該膠原酶廣泛應(yīng)用于醫(yī)療、食品等工業(yè)領(lǐng)域奠定了理論和方法基礎(chǔ)。
[Abstract]:銆愮洰鐨勩，

本文編號：1598249