本文選題：透明質(zhì)酸　切入點(diǎn)：溶血素-S　出處：《西南交通大學(xué)》2016年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：存在于生物機(jī)體各個組織器官中的透明質(zhì)酸是一種酸性黏多糖。由于該物質(zhì)具有優(yōu)良粘彈性和高度水合性的理化性質(zhì),從而能越來越廣泛的應(yīng)用于臨床醫(yī)學(xué)、研究醫(yī)學(xué)、化妝品及食品藥品添加劑等相關(guān)領(lǐng)域,因此,在科學(xué)研究上具有極大價值。在工業(yè)生產(chǎn)上,馬鏈球菌獸疫亞種是發(fā)酵生產(chǎn)透明質(zhì)酸的重要菌種之一。但由于該菌有一定的致病性,長期以來,人們擔(dān)心利用該菌株發(fā)酵生產(chǎn)得到透明質(zhì)酸產(chǎn)品的安全能否有保證。特別是該菌株所產(chǎn)生毒力因子——溶血素-S(SLS)能夠造成典型的細(xì)胞溶血和細(xì)胞膜損壞。因此,我們要求發(fā)酵法獲得的透明質(zhì)酸中不能含有鏈球菌SLS毒素。研究發(fā)現(xiàn),在化膿性鏈球菌中溶血素-S的基因sagA是一調(diào)控基因,能夠調(diào)控透明質(zhì)酸及毒力因子的表達(dá)。我們推測在sagA基因結(jié)構(gòu)相似的馬鏈球菌獸疫亞種中,sagA基因同樣能夠調(diào)控透明質(zhì)酸及毒力因子的表達(dá)。本論文通過采用溫度敏感自殺載體系統(tǒng)和電轉(zhuǎn)化的方法構(gòu)建了馬鏈球菌獸疫亞種sagA基因缺失突變菌株和其回復(fù)突變菌株,使得HA生產(chǎn)菌不產(chǎn)溶血素-S。同時利用不同的方法對馬鏈球菌獸疫亞種相關(guān)毒力因子進(jìn)行了研究。結(jié)果發(fā)現(xiàn),相對于野生菌來說,sagA基因缺失突變菌中HA產(chǎn)量提高了30%、分子量下降了一個數(shù)量級。另外,與毒力相關(guān)的甘油醛-3-磷酸脫氫酶、Hylc、菌體表面蛋白含量顯著降低,透明質(zhì)酸分解酶含量增加。通過細(xì)胞實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn),菌體的總毒力明顯下降。利用單因素實(shí)驗(yàn)和正交實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步使透明質(zhì)酸產(chǎn)量提高了20%左右。本研究證明,在馬鏈球菌獸疫亞種中sagA基因不僅表達(dá)溶血素-S,同時對毒力因子具有調(diào)控作用。sagA基因的缺失,對菌株透明質(zhì)酸和透明質(zhì)酸分解酶具有上調(diào)作用,對甘油醛-3-磷酸脫氫酶、Hylc、菌體表面蛋白等毒力因子具有下調(diào)作用。
[Abstract]:Hyaluronic acid, which exists in various tissues and organs of organism, is an acidic mucopolysaccharide. Due to its excellent viscoelastic and highly hydrated physicochemical properties, hyaluronic acid can be more and more widely used in clinical medicine and medical research. Cosmetics, food and drug additives and other related fields, therefore, in scientific research has great value. In industrial production, Streptococcus equi is one of the most important strains of hyaluronic acid in fermentation. However, because of its pathogenicity, Streptococcus equi has long been responsible for the production of hyaluronic acid. There is concern that the safety of producing hyaluronic acid products by using the strain can be guaranteed. In particular, the virulence factor produced by the strain-hemolysin-SLSs-can cause typical cell hemolysis and cell membrane damage. We require that hyaluronic acid obtained by fermentation do not contain streptococcus SLS toxin. Studies have found that the gene sagA of hemolysin S is a regulatory gene in Streptococcus pyogenes. The expression of hyaluronic acid and virulence factor can be regulated. We speculate that SagA gene can also regulate the expression of hyaluronic acid and virulence factor in the subspecies of Streptococcus equi with similar structure of sagA gene. In this paper, we use temperature to control the expression of hyaluronic acid and virulence factor. The mutant strain of sagA gene deletion and its reverse-mutation strain of Streptococcus equi subspecies were constructed by using the sensitive suicide vector system and electrical transformation method. At the same time, different methods were used to study the virulence factors related to the subspecies of Streptococcus equi. Compared with wild bacteria, HA production increased by 30% and molecular weight decreased by one order of magnitude. In addition, the virulence related to glyceraldehyde 3 phosphate dehydrogenase Hylc, the protein content on cell surface decreased significantly. The content of hyaluronidase was increased. The total virulence of the cell was obviously decreased by cell experiment. The yield of hyaluronic acid was further increased by 20% or so by single factor experiment and orthogonal experiment. In the subspecies of Streptococcus equi, sagA gene not only expressed hemolysin -S, but also regulated the deletion of virulence factor. It also up-regulated hyaluronic acid and hyaluronidase. It can down-regulate virulence factors such as glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase Hylc and cell surface protein.
【學(xué)位授予單位】：西南交通大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：Q93

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本文編號：1583243