發(fā)布時(shí)間：2018-03-07 18:56

  本文選題：盾殼霉　切入點(diǎn)：CmMR1基因　出處：《華中農(nóng)業(yè)大學(xué)》2017年碩士論文　論文類(lèi)型：學(xué)位論文

【摘要】：盾殼霉(Coniothyrium minitans)是一種能寄生核盤(pán)菌(Sclerotinia sclerotiorum)菌絲和菌核的重寄生真菌,可用于菌核病的生物防治。盾殼霉菌株ZS-1的T-DNA插入突變體庫(kù)在前期研究中已構(gòu)建,本研究以其中一個(gè)產(chǎn)黑色素缺陷型突變體ZS-1TN24363為材料進(jìn)行了深入研究,主要結(jié)果如下:1.通過(guò)hiTAIL-PCR克隆到了T-DNA插入位點(diǎn)處的側(cè)翼序列,比對(duì)分析發(fā)現(xiàn)T-DNA插入破壞了一個(gè)可能的基因。該基因全長(zhǎng)3167 bp,預(yù)測(cè)含有3個(gè)外顯子,2個(gè)內(nèi)含子,編碼一個(gè)含1011個(gè)氨基酸的蛋白。該蛋白N端含有一個(gè)Zn-clus和Med3的保守結(jié)構(gòu)域,C端含有一個(gè)fungal-TF-MHR的保守結(jié)構(gòu)域。進(jìn)化樹(shù)分析發(fā)現(xiàn)該蛋白與Clohesyomyces aquaticus的轉(zhuǎn)錄因子Cmr1蛋白相似性最高,故將該基因命名為CmMR1。2.利用基因敲除技術(shù)獲得了3個(gè)CmMR1基因敲除轉(zhuǎn)化子。敲除轉(zhuǎn)化子和突變體ZS-1TN24363的菌落形態(tài)相似,菌落顯橙色無(wú)黑色素沉積,可產(chǎn)生無(wú)色透明的分生孢子器和分生孢子。CmMR1基因互補(bǔ)可使敲除轉(zhuǎn)化子恢復(fù)產(chǎn)黑色素表型。基因CmMR1對(duì)菌株的生長(zhǎng)速率、產(chǎn)孢量、生物學(xué)產(chǎn)量、寄生核盤(pán)菌菌絲菌和核的能力、對(duì)高滲的耐受性等均無(wú)明顯影響,但CmMR1的敲除使菌絲中ROS含量增多,抗紫外線能力減弱。3.基因CmMR1的敲除使黑色素合成酶基因Cm4HNR、CmSCD、Cm3HNR、CmLAC的表達(dá)量下調(diào),證明CmMR1參與調(diào)控這些黑色素合成酶基因的表達(dá)。上述結(jié)果表明,基因CmMR1不影響盾殼霉的生長(zhǎng)、產(chǎn)孢和寄生,但是與黑色素的生物合成有關(guān)。
[Abstract]:C.minitans (Coniothyrium minitans) is a parasitic Sclerotinia (Sclerotinia sclerotiorum) hyperparasitic fungi mycelium and sclerotium, can be used for biological control of Sclerotinia sclerotiorum. C.minitans ZS-1 T-DNA insertion mutant library has been constructed in the previous study, this research has conducted the thorough research to a black pigmented mutant ZS-1TN24363 in the material, the main results are as follows: 1. flanking sequence was cloned by hiTAIL-PCR to the T-DNA insertion site of the alignment analysis showed that the T-DNA insertion damaged a possible gene. The gene was 3167 BP. The forecast contains 3 exons and 2 introns, encoding a protein of 1011 amino acids conserved domain. The protein contains a Zn-clus N end and Med3 end, conserved domain of C contains a fungal-TF-MHR. Phylogenetic analysis showed that the transcription factor C protein and Clohesyomyces aquaticus MR1 protein is the highest similarity, so the gene was named CmMR1.2. using gene knockout technology obtained 3 CmMR1 gene knockout transformants. Knockout transformants and colony morphology mutants are similar to that of ZS-1TN24363, no significant colony orange melanin deposition, can produce colorless and transparent conidia and conidia of.CmMR1 the complementary gene knockout transformants restored black pigmented phenotype. The growth rate of CmMR1 gene of strain, sporulation, biological yield, parasitic Sclerotinia mycelium and nuclear power, had no significant effect on osmotic tolerance, but CmMR1 knockout ROS content in mycelia increased resistance ultraviolet CmMR1 knockout attenuated.3. melanin synthase gene Cm4HNR, CmSCD, Cm3HNR, CmLAC expression down regulated expression of CmMR1 in the regulation of melanin biosynthesis gene. The results showed that the CmMR1 gene does not affect the shield shell The growth, sporulation, and parasitism of molds, but related to the biosynthesis of melanin.

【學(xué)位授予單位】：華中農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類(lèi)號(hào)】：S476

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：1580537