本文選題：血管緊張素轉(zhuǎn)換酶2　切入點(diǎn)：實(shí)驗(yàn)性自身免疫性葡萄膜炎　出處：《重慶醫(yī)科大學(xué)》2017年博士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：背景:葡萄膜炎是一種由自身免疫或感染等原因引起的嚴(yán)重威脅患者視力的炎癥性眼病。它是導(dǎo)致全球范圍內(nèi)青壯年視力損害,甚至致盲的主要原因之一。實(shí)驗(yàn)性自身免疫性葡萄膜炎(EAU)是一種經(jīng)典的模擬人自身免疫性葡萄膜炎的動(dòng)物模型。它是一種臨床表現(xiàn)和特點(diǎn)與多種葡萄膜疾病非常相似的T細(xì)胞介導(dǎo)的疾病模型,比如Beh?et’s病(BD)和Vogt-Koyanagi-Harada(VKH)綜合征。目前研究較為透徹的是,有兩種輔助性T(Th)細(xì)胞亞型:Th1和Th17細(xì)胞在葡萄膜炎的發(fā)病機(jī)制中發(fā)揮著至關(guān)重要的作用。腎素血管緊張素系統(tǒng)(RAS)是調(diào)節(jié)心血管以及腎臟系統(tǒng)生理功能的重要激素系統(tǒng)。RAS系統(tǒng)的功能紊亂還可以導(dǎo)致多種炎癥以及自身免疫性疾病。近年來(lái)新發(fā)現(xiàn)了一條主要由血管緊張素轉(zhuǎn)換酶2(ACE2)、血管緊張素Ang-(1-7)及其受體Mas組成的RAS系統(tǒng)保護(hù)性軸。ACE2/Ang-(1 7)/Mas軸不僅可以抵消經(jīng)典的損傷性軸ACE/AngII/AT1R帶來(lái)的損害性效應(yīng),還可以直接發(fā)揮一系列如抗纖維化、抗炎癥等保護(hù)性效應(yīng)。前期研究表明,增加ACE2的表達(dá),從而活化ACE2/Ang-(1 7)/Mas軸可在糖尿病視網(wǎng)膜病變以及LPS誘導(dǎo)的炎癥性眼病中發(fā)揮抗炎作用。然而,過(guò)表達(dá)ACE2在自身免疫性炎性眼病中的保護(hù)作用及其具體分子機(jī)制尚不清楚。基于前述研究背景,本課題主要針對(duì)以下幾個(gè)方面內(nèi)容進(jìn)行了研究:(1)AAV8介導(dǎo)的ACE2基因轉(zhuǎn)導(dǎo)是否可以在EAU中發(fā)揮保護(hù)作用?(2)過(guò)表達(dá)ACE2是否能調(diào)節(jié)EAU小鼠眼部的免疫反應(yīng)?(3)過(guò)表達(dá)ACE2在EAU中發(fā)揮的保護(hù)作用是否由ACE2/Ang-(1-7)/Mas軸介導(dǎo)?(4)過(guò)表達(dá)ACE2在EAU中發(fā)揮保護(hù)作用的可能分子機(jī)制。通過(guò)對(duì)這幾部分內(nèi)容的探索,期望能找到葡萄膜炎新的治療靶點(diǎn)。目的:活化ACE2/Ang-(1-7)/Mas軸在多種炎癥性及自身免疫性疾病中有重要的保護(hù)作用。因此,本研究的目的是探討AAV8介導(dǎo)的ACE2基因過(guò)表達(dá)在EAU小鼠中的保護(hù)作用,以及過(guò)表達(dá)ACE2在EAU病理過(guò)程中發(fā)揮抗炎作用的可能分子機(jī)制。方法:B10.RIII小鼠行視網(wǎng)膜下腔注射AAV8-ACE2或其對(duì)照載體AAV8-e GFP,3周后小鼠皮下注射光感受器間維生素A類結(jié)合蛋白(IRBP161-180)肽段誘導(dǎo)EAU模型。在誘導(dǎo)EAU模型后不同時(shí)間點(diǎn)對(duì)小鼠眼前房炎癥進(jìn)行裂隙燈下觀察及拍照,并同時(shí)進(jìn)行臨床評(píng)分。并在炎癥高峰期(第14天),取小鼠眼球進(jìn)行石蠟切片,行HE染色及進(jìn)行組織病理學(xué)評(píng)分。誘導(dǎo)EAU后第14天,采用視網(wǎng)膜電圖(ERG)檢測(cè)小鼠視網(wǎng)膜功能的變化。利用real-time PCR對(duì)視網(wǎng)膜炎癥因子以及M1/M2型巨噬細(xì)胞表面標(biāo)記物的表達(dá)進(jìn)行檢測(cè)。在EAU小鼠的脾臟淋巴細(xì)胞中,采用相應(yīng)通路的抑制劑對(duì)可能參與EAU病理過(guò)程的信號(hào)通路進(jìn)行酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)檢測(cè)。進(jìn)一步,對(duì)篩選出的信號(hào)通路在小鼠視網(wǎng)膜樣本中行Western Blotting驗(yàn)證。結(jié)果:AAV8-ACE2+EAU組小鼠眼前房炎癥及臨床評(píng)分均明顯低于AAV8-e GFP+EAU組及EAU組小鼠。組織病理學(xué)HE染色顯示AAV8-ACE2處理的EAU小鼠視網(wǎng)膜褶皺以及炎癥細(xì)胞的滲出均較AAV8-e GFP處理的EAU小鼠顯著減少。AAV8-ACE2+EAU組小鼠在ERG檢測(cè)的明適應(yīng)以及暗適應(yīng)中,其a波、b波的振幅均較AAV8-e GFP+EAU組及EAU組小鼠明顯恢復(fù)。AAV8-ACE2處理的EAU小鼠視網(wǎng)膜促炎因子的m RNA表達(dá)較AAV8-e GFP處理組明顯降低,而抑炎因子明顯增高。AAV8-ACE2轉(zhuǎn)導(dǎo)抑制EAU小鼠眼部Th1/Th17反應(yīng),并促進(jìn)M1型巨噬細(xì)胞向M2型轉(zhuǎn)化。ELISA及Western Blotting結(jié)果提示MAPK,NF-κB及STAT3通路均參與ACE2過(guò)表達(dá)在EAU中的保護(hù)作用。ACE2/Ang-(1-7)/Mas軸的抑制劑A-779可以抵消ACE2過(guò)表達(dá)發(fā)揮的抗炎效應(yīng),提示過(guò)表達(dá)ACE2在EAU小鼠中發(fā)揮的抗炎作用主要由ACE2/Ang-(1-7)/Mas軸介導(dǎo)。結(jié)論:AAV8介導(dǎo)的ACE2過(guò)表達(dá)可通過(guò)活化RAS系統(tǒng)保護(hù)性軸:ACE2/Ang-(1-7)/Mas從而在EAU小鼠眼部炎癥中發(fā)揮保護(hù)作用。這條保護(hù)性軸可以調(diào)節(jié)眼部Th1/Th17反應(yīng)以及M1/M2型巨噬細(xì)胞的極化。我們的研究結(jié)果提示活化ACE2/Ang-(1-7)/Mas軸在調(diào)控眼部免疫反應(yīng)中發(fā)揮重要作用。增強(qiáng)ACE2表達(dá)可能為葡萄膜炎提供新的治療策略。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R773.9

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本文編號(hào)：1578886