本文選題：血管緊張素轉換酶2　切入點：實驗性自身免疫性葡萄膜炎　出處：《重慶醫(yī)科大學》2017年博士論文　論文類型：學位論文

【摘要】：背景:葡萄膜炎是一種由自身免疫或感染等原因引起的嚴重威脅患者視力的炎癥性眼病。它是導致全球范圍內青壯年視力損害,甚至致盲的主要原因之一。實驗性自身免疫性葡萄膜炎(EAU)是一種經(jīng)典的模擬人自身免疫性葡萄膜炎的動物模型。它是一種臨床表現(xiàn)和特點與多種葡萄膜疾病非常相似的T細胞介導的疾病模型,比如Beh?et’s病(BD)和Vogt-Koyanagi-Harada(VKH)綜合征。目前研究較為透徹的是,有兩種輔助性T(Th)細胞亞型:Th1和Th17細胞在葡萄膜炎的發(fā)病機制中發(fā)揮著至關重要的作用。腎素血管緊張素系統(tǒng)(RAS)是調節(jié)心血管以及腎臟系統(tǒng)生理功能的重要激素系統(tǒng)。RAS系統(tǒng)的功能紊亂還可以導致多種炎癥以及自身免疫性疾病。近年來新發(fā)現(xiàn)了一條主要由血管緊張素轉換酶2(ACE2)、血管緊張素Ang-(1-7)及其受體Mas組成的RAS系統(tǒng)保護性軸。ACE2/Ang-(1 7)/Mas軸不僅可以抵消經(jīng)典的損傷性軸ACE/AngII/AT1R帶來的損害性效應,還可以直接發(fā)揮一系列如抗纖維化、抗炎癥等保護性效應。前期研究表明,增加ACE2的表達,從而活化ACE2/Ang-(1 7)/Mas軸可在糖尿病視網(wǎng)膜病變以及LPS誘導的炎癥性眼病中發(fā)揮抗炎作用。然而,過表達ACE2在自身免疫性炎性眼病中的保護作用及其具體分子機制尚不清楚�；谇笆鲅芯勘尘�,本課題主要針對以下幾個方面內容進行了研究:(1)AAV8介導的ACE2基因轉導是否可以在EAU中發(fā)揮保護作用?(2)過表達ACE2是否能調節(jié)EAU小鼠眼部的免疫反應?(3)過表達ACE2在EAU中發(fā)揮的保護作用是否由ACE2/Ang-(1-7)/Mas軸介導?(4)過表達ACE2在EAU中發(fā)揮保護作用的可能分子機制。通過對這幾部分內容的探索,期望能找到葡萄膜炎新的治療靶點。目的:活化ACE2/Ang-(1-7)/Mas軸在多種炎癥性及自身免疫性疾病中有重要的保護作用。因此,本研究的目的是探討AAV8介導的ACE2基因過表達在EAU小鼠中的保護作用,以及過表達ACE2在EAU病理過程中發(fā)揮抗炎作用的可能分子機制。方法:B10.RIII小鼠行視網(wǎng)膜下腔注射AAV8-ACE2或其對照載體AAV8-e GFP,3周后小鼠皮下注射光感受器間維生素A類結合蛋白(IRBP161-180)肽段誘導EAU模型。在誘導EAU模型后不同時間點對小鼠眼前房炎癥進行裂隙燈下觀察及拍照,并同時進行臨床評分。并在炎癥高峰期(第14天),取小鼠眼球進行石蠟切片,行HE染色及進行組織病理學評分。誘導EAU后第14天,采用視網(wǎng)膜電圖(ERG)檢測小鼠視網(wǎng)膜功能的變化。利用real-time PCR對視網(wǎng)膜炎癥因子以及M1/M2型巨噬細胞表面標記物的表達進行檢測。在EAU小鼠的脾臟淋巴細胞中,采用相應通路的抑制劑對可能參與EAU病理過程的信號通路進行酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)檢測。進一步,對篩選出的信號通路在小鼠視網(wǎng)膜樣本中行Western Blotting驗證。結果:AAV8-ACE2+EAU組小鼠眼前房炎癥及臨床評分均明顯低于AAV8-e GFP+EAU組及EAU組小鼠。組織病理學HE染色顯示AAV8-ACE2處理的EAU小鼠視網(wǎng)膜褶皺以及炎癥細胞的滲出均較AAV8-e GFP處理的EAU小鼠顯著減少。AAV8-ACE2+EAU組小鼠在ERG檢測的明適應以及暗適應中,其a波、b波的振幅均較AAV8-e GFP+EAU組及EAU組小鼠明顯恢復。AAV8-ACE2處理的EAU小鼠視網(wǎng)膜促炎因子的m RNA表達較AAV8-e GFP處理組明顯降低,而抑炎因子明顯增高。AAV8-ACE2轉導抑制EAU小鼠眼部Th1/Th17反應,并促進M1型巨噬細胞向M2型轉化。ELISA及Western Blotting結果提示MAPK,NF-κB及STAT3通路均參與ACE2過表達在EAU中的保護作用。ACE2/Ang-(1-7)/Mas軸的抑制劑A-779可以抵消ACE2過表達發(fā)揮的抗炎效應,提示過表達ACE2在EAU小鼠中發(fā)揮的抗炎作用主要由ACE2/Ang-(1-7)/Mas軸介導。結論:AAV8介導的ACE2過表達可通過活化RAS系統(tǒng)保護性軸:ACE2/Ang-(1-7)/Mas從而在EAU小鼠眼部炎癥中發(fā)揮保護作用。這條保護性軸可以調節(jié)眼部Th1/Th17反應以及M1/M2型巨噬細胞的極化。我們的研究結果提示活化ACE2/Ang-(1-7)/Mas軸在調控眼部免疫反應中發(fā)揮重要作用。增強ACE2表達可能為葡萄膜炎提供新的治療策略。
[Abstract]:......
【學位授予單位】：重慶醫(yī)科大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：R773.9

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本文編號：1578886