本文選題：骨肉瘤　切入點：DDX49基因　出處：《蘭州大學》2017年碩士論文　論文類型：學位論文

【摘要】：背景骨肉瘤是最常見的骨原發(fā)性惡性腫瘤,其惡性程度高,容易發(fā)生遠處轉移。與其它的骨腫瘤相比,骨肉瘤患者的預后較差。然而,骨肉瘤患者的生存率在過去30年里沒有得到明顯的提高。很多學者認為通過研究骨肉瘤的生物學特性將有助于找到治療骨肉瘤的有效方法。DEAD-box RNA解旋酶不僅參與幾乎所有與RNA代謝有關的過程,還參與調(diào)控轉錄和翻譯,并且與細胞增殖及腫瘤轉化有關。DDX49是DEAD-box RNA解旋酶家族中的一個成員,目前尚無具體闡述DDX49在腫瘤細胞中的表達及其生物學功能的研究報道。目的本研究旨在研究DDX49基因在骨肉瘤細胞增殖及凋亡中的作用,為骨肉瘤的診斷和治療提供新的分子靶點。方法用實時定量聚合酶鏈反應(Quantitative real-time polymerase chain reaction,qRT-PCR)檢測DDX49基因在四種骨肉瘤細胞中的表達,用慢病毒介導的RNA干擾技術沉默DDX49在U-2OS細胞中的表達,然后用qRT-PCR檢測DDX49基因的敲減效率,用Celigo細胞掃描分析儀動態(tài)觀察細胞增殖情況及細胞個數(shù)的變化,用噻唑蘭(methylthiazoletetrazolium,MTT)實驗檢測細胞活力,用流式細胞儀檢測細胞凋亡。結果qRT-PCR結果DDX49基因在四種骨肉瘤細胞中有表達;經(jīng)RNA干擾慢病毒感染U-2OS細胞3天后,qRT-PCR結果顯示RNA干擾慢病毒能有效抑制U-2OS細胞中DDX49基因在mRNA水平的表達;經(jīng)慢病毒感染U-2OS細胞后用Celigo細胞掃描分析儀連續(xù)檢測5天,結果顯示,抑制DDX49基因的表達能顯著抑制U-2OS細胞的增殖;經(jīng)慢病毒感染U-2OS細胞3天后,MTT實驗連續(xù)檢測5天,結果顯示,與DDX49基因非沉默組相比,沉默組在波長490 nm處的吸光率隨時間增加逐漸降低,表明抑制DDX49基因的表達能明顯降低U-2OS細胞的活力;經(jīng)慢病毒感染5天后,DDX49沉默組發(fā)生凋亡的U-2OS細胞顯著增加,提示DDX49基因與U-2OS細胞的凋亡顯著相關。結論DDX49基因在人骨肉瘤細胞U-2OS細胞的增殖和凋亡中起重要作用,可能是潛在的治療骨肉瘤的分子靶點。
[Abstract]:Background Osteosarcoma is the most common primary malignant tumor of bone, which is highly malignant and prone to distant metastasis. The survival rate of osteosarcoma patients has not improved significantly in the past 30 years. Many scholars believe that studying the biological characteristics of osteosarcoma will help to find an effective way to treat osteosarcoma. DEAD-box RNA helicase is not only involved in several aspects of osteosarcoma. All processes associated with RNA metabolism, DDX49 is also involved in the regulation of transcription and translation, and is a member of the DEAD-box RNA helicase family associated with cell proliferation and tumor transformation. At present, there are no reports on the expression and biological function of DDX49 in tumor cells. Objective to study the role of DDX49 gene in the proliferation and apoptosis of osteosarcoma cells. Methods the expression of DDX49 gene in four kinds of osteosarcoma cells was detected by real-time quantitative real-time polymerase chain reactionation qRT-PCR, which provided a new molecular target for the diagnosis and treatment of osteosarcoma. Lentivirus mediated RNA interference technique was used to silence the expression of DDX49 in U-2OS cells, then qRT-PCR was used to detect the knockdown efficiency of DDX49 gene, and Celigo cell scanning analyzer was used to dynamically observe the cell proliferation and cell number. Cell viability was detected by methylthiazole tetrazolium MTT assay and apoptosis was detected by flow cytometry. Results qRT-PCR results showed that DDX49 gene was expressed in four osteosarcoma cells. After 3 days of lentivirus infection with RNA, the results of qRT-PCR showed that RNA interfering lentivirus could effectively inhibit the expression of DDX49 gene in U-2OS cells at the mRNA level, and detected by Celigo cell scanning analyzer for 5 days after lentivirus infection. Inhibiting the expression of DDX49 gene could significantly inhibit the proliferation of U-2OS cells, and after 3 days of lentivirus infection, the proliferation of U-2OS cells was detected continuously for 5 days. The results showed that, compared with the non-silencing group of DDX49 gene, the proliferation of U-2OS cells was significantly inhibited after lentivirus infection. The absorptivity of the silencing group at 490nm decreased gradually with the increase of time, which indicated that inhibiting the expression of DDX49 gene could significantly reduce the activity of U-2OS cells, and that the apoptosis of U-2OS cells in the silencing group after 5 days of lentivirus infection was significantly increased. Conclusion DDX49 gene plays an important role in the proliferation and apoptosis of human osteosarcoma cell line U-2OS and may be a potential molecular target for the treatment of osteosarcoma.
【學位授予單位】：蘭州大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：R738.1

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本文編號：1573978