發(fā)布時間：2018-03-06 08:00

  本文選題：骨肉瘤　切入點(diǎn)：DDX49基因　出處：《蘭州大學(xué)》2017年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：背景骨肉瘤是最常見的骨原發(fā)性惡性腫瘤,其惡性程度高,容易發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移。與其它的骨腫瘤相比,骨肉瘤患者的預(yù)后較差。然而,骨肉瘤患者的生存率在過去30年里沒有得到明顯的提高。很多學(xué)者認(rèn)為通過研究骨肉瘤的生物學(xué)特性將有助于找到治療骨肉瘤的有效方法。DEAD-box RNA解旋酶不僅參與幾乎所有與RNA代謝有關(guān)的過程,還參與調(diào)控轉(zhuǎn)錄和翻譯,并且與細(xì)胞增殖及腫瘤轉(zhuǎn)化有關(guān)。DDX49是DEAD-box RNA解旋酶家族中的一個成員,目前尚無具體闡述DDX49在腫瘤細(xì)胞中的表達(dá)及其生物學(xué)功能的研究報道。目的本研究旨在研究DDX49基因在骨肉瘤細(xì)胞增殖及凋亡中的作用,為骨肉瘤的診斷和治療提供新的分子靶點(diǎn)。方法用實(shí)時定量聚合酶鏈反應(yīng)(Quantitative real-time polymerase chain reaction,qRT-PCR)檢測DDX49基因在四種骨肉瘤細(xì)胞中的表達(dá),用慢病毒介導(dǎo)的RNA干擾技術(shù)沉默DDX49在U-2OS細(xì)胞中的表達(dá),然后用qRT-PCR檢測DDX49基因的敲減效率,用Celigo細(xì)胞掃描分析儀動態(tài)觀察細(xì)胞增殖情況及細(xì)胞個數(shù)的變化,用噻唑蘭(methylthiazoletetrazolium,MTT)實(shí)驗(yàn)檢測細(xì)胞活力,用流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞凋亡。結(jié)果qRT-PCR結(jié)果DDX49基因在四種骨肉瘤細(xì)胞中有表達(dá);經(jīng)RNA干擾慢病毒感染U-2OS細(xì)胞3天后,qRT-PCR結(jié)果顯示RNA干擾慢病毒能有效抑制U-2OS細(xì)胞中DDX49基因在mRNA水平的表達(dá);經(jīng)慢病毒感染U-2OS細(xì)胞后用Celigo細(xì)胞掃描分析儀連續(xù)檢測5天,結(jié)果顯示,抑制DDX49基因的表達(dá)能顯著抑制U-2OS細(xì)胞的增殖;經(jīng)慢病毒感染U-2OS細(xì)胞3天后,MTT實(shí)驗(yàn)連續(xù)檢測5天,結(jié)果顯示,與DDX49基因非沉默組相比,沉默組在波長490 nm處的吸光率隨時間增加逐漸降低,表明抑制DDX49基因的表達(dá)能明顯降低U-2OS細(xì)胞的活力;經(jīng)慢病毒感染5天后,DDX49沉默組發(fā)生凋亡的U-2OS細(xì)胞顯著增加,提示DDX49基因與U-2OS細(xì)胞的凋亡顯著相關(guān)。結(jié)論DDX49基因在人骨肉瘤細(xì)胞U-2OS細(xì)胞的增殖和凋亡中起重要作用,可能是潛在的治療骨肉瘤的分子靶點(diǎn)。
[Abstract]:Background Osteosarcoma is the most common primary malignant tumor of bone, which is highly malignant and prone to distant metastasis. The survival rate of osteosarcoma patients has not improved significantly in the past 30 years. Many scholars believe that studying the biological characteristics of osteosarcoma will help to find an effective way to treat osteosarcoma. DEAD-box RNA helicase is not only involved in several aspects of osteosarcoma. All processes associated with RNA metabolism, DDX49 is also involved in the regulation of transcription and translation, and is a member of the DEAD-box RNA helicase family associated with cell proliferation and tumor transformation. At present, there are no reports on the expression and biological function of DDX49 in tumor cells. Objective to study the role of DDX49 gene in the proliferation and apoptosis of osteosarcoma cells. Methods the expression of DDX49 gene in four kinds of osteosarcoma cells was detected by real-time quantitative real-time polymerase chain reactionation qRT-PCR, which provided a new molecular target for the diagnosis and treatment of osteosarcoma. Lentivirus mediated RNA interference technique was used to silence the expression of DDX49 in U-2OS cells, then qRT-PCR was used to detect the knockdown efficiency of DDX49 gene, and Celigo cell scanning analyzer was used to dynamically observe the cell proliferation and cell number. Cell viability was detected by methylthiazole tetrazolium MTT assay and apoptosis was detected by flow cytometry. Results qRT-PCR results showed that DDX49 gene was expressed in four osteosarcoma cells. After 3 days of lentivirus infection with RNA, the results of qRT-PCR showed that RNA interfering lentivirus could effectively inhibit the expression of DDX49 gene in U-2OS cells at the mRNA level, and detected by Celigo cell scanning analyzer for 5 days after lentivirus infection. Inhibiting the expression of DDX49 gene could significantly inhibit the proliferation of U-2OS cells, and after 3 days of lentivirus infection, the proliferation of U-2OS cells was detected continuously for 5 days. The results showed that, compared with the non-silencing group of DDX49 gene, the proliferation of U-2OS cells was significantly inhibited after lentivirus infection. The absorptivity of the silencing group at 490nm decreased gradually with the increase of time, which indicated that inhibiting the expression of DDX49 gene could significantly reduce the activity of U-2OS cells, and that the apoptosis of U-2OS cells in the silencing group after 5 days of lentivirus infection was significantly increased. Conclusion DDX49 gene plays an important role in the proliferation and apoptosis of human osteosarcoma cell line U-2OS and may be a potential molecular target for the treatment of osteosarcoma.
【學(xué)位授予單位】：蘭州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R738.1

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 楊勝武;骨肉瘤預(yù)后因素的研究進(jìn)展[J];國外醫(yī)學(xué)(骨科學(xué)分冊);2002年04期

2 李健,郭衛(wèi),楊榮利,曲華毅,樊瑞峰;影響骨肉瘤預(yù)后因素的探討[J];中國骨腫瘤骨病;2004年06期

3 鮑同柱,趙紅衛(wèi),鄭啟新,劉萬軍,劉勇;反義轉(zhuǎn)化生長因子-β1基因?qū)侨饬黾?xì)胞表達(dá)轉(zhuǎn)移相關(guān)因子的影響[J];中華實(shí)驗(yàn)外科雜志;2005年04期

4 牛聚偉;吳剛;祝少博;漆白文;錢煒;喻愛喜;;血管擴(kuò)張刺激磷蛋白與骨肉瘤細(xì)胞遷移能力的關(guān)系[J];武漢大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)版);2012年06期

5 孟令祥,于錫欣,杜德利,王冠忠;P~(16)基因在骨肉瘤中的表達(dá)[J];山東醫(yī)藥;1999年06期

6 林娜,蔡宣松,梅炯;骨肉瘤預(yù)后因素探討[J];實(shí)用腫瘤雜志;2000年05期

7 姜文學(xué),董天華,吳士良,馬文雄;骨肉瘤特異性細(xì)胞毒T淋巴細(xì)胞的誘導(dǎo)及其抗腫瘤特性的研究[J];中華骨科雜志;2000年01期

8 馬忠泰,栗懷廣,施學(xué)東;骨肉瘤的化療與療效判斷[J];中華骨科雜志;2000年S1期

9 岳文,楊連甲,馬明,董紹忠;體內(nèi)和體外實(shí)驗(yàn)觀察骨形成蛋白在骨肉瘤中的作用[J];口腔頜面外科雜志;2000年03期

10 姜文學(xué),董天華,吳士良,馬文雄;體外誘導(dǎo)骨肉瘤特異性細(xì)胞毒T淋巴細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)研究[J];中國矯形外科雜志;2000年03期

相關(guān)會議論文 前10條

1 李紅;龍勉;;力學(xué)微擾對骨肉瘤細(xì)胞生物學(xué)行為的影響[A];第十次中國生物物理學(xué)術(shù)大會論文摘要集[C];2006年

2 金先慶;羅小輯;;骨肉瘤細(xì)胞骨分化標(biāo)志檢測及臨床意義[A];中國抗癌協(xié)會第七屆全國小兒腫瘤學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2007年

3 李進(jìn);楊述華;鄒利軍;邵增務(wù);廖翔;;單啟動子雙表達(dá)載體pIRES-p14ARF-p53的構(gòu)建及其對骨肉瘤細(xì)胞增殖的抑制作用[A];泛長江流域骨科新進(jìn)展暨第九屆全國骨科護(hù)理研討會論文匯編[C];2007年

4 李進(jìn);楊述華;鄒利軍;邵增務(wù);廖翔;;單啟動子雙表達(dá)載體pIRES-p14ARF-p53的構(gòu)建及其對骨肉瘤細(xì)胞增殖的抑制作用[A];第八屆全國脊柱脊髓損傷學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2007年

5 胡宏偉;孫其志;;骨肉瘤的治療進(jìn)展[A];第十七屆中國康協(xié)肢殘康復(fù)學(xué)術(shù)年會暨第三屆海峽兩岸OS會議論文匯編[C];2008年

6 于秀淳;王偉;;影響骨肉瘤新輔助化療療效的多因素分析[A];第四屆中國腫瘤學(xué)術(shù)大會暨第五屆海峽兩岸腫瘤學(xué)術(shù)會議教育集[C];2006年

7 張瑤;;四肢長骨骨肉瘤合并病理性骨折圍手術(shù)期的護(hù)理[A];全國腫瘤護(hù)理學(xué)術(shù)交流暨專題講座會議論文匯編[C];2006年

8 張瑤;;四肢長骨骨肉瘤合并病理性骨折圍手術(shù)期的護(hù)理[A];全國第八屆骨科護(hù)理學(xué)術(shù)交流暨專題講座會議論文匯編[C];2006年

9 張志明;;外傷誘發(fā)骨肉瘤一例分析[A];第四次全國法醫(yī)學(xué)術(shù)交流會論文集（上卷）[C];1991年

10 楊迪生;解先寬;葉招明;陶惠民;;反義C-myc重組腺病毒的構(gòu)建及其抗骨肉瘤細(xì)胞作用的實(shí)驗(yàn)研究[A];2004年浙江省骨科學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2004年

相關(guān)重要報紙文章 前2條

1 任勇 李運(yùn)紅 胡顏;莫名關(guān)節(jié)痛青少年警惕骨肉瘤[N];天津日報;2006年

2 黃金昶;骨肉瘤可試用斑蝥治療[N];健康報;2005年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 劉巍;UHRF1在骨肉瘤細(xì)胞侵襲過程中的作用及其機(jī)制研究[D];山西醫(yī)科大學(xué);2015年

2 陳杰;HDAC5在骨肉瘤細(xì)胞增殖中的表觀遺傳學(xué)調(diào)控研究[D];復(fù)旦大學(xué);2014年

3 馬萬里;miR-148a在骨肉瘤患者體內(nèi)的表達(dá)及其功能機(jī)制的研究[D];山東大學(xué);2015年

4 田吉光;CD271~+骨肉瘤干細(xì)胞特性研究及以DNA-PK為靶點(diǎn)逆轉(zhuǎn)骨肉瘤化療耐藥性的研究[D];山東大學(xué);2015年

5 成功;內(nèi)臟脂肪素對U2OS細(xì)胞株遷移與侵襲的影響及其機(jī)制的實(shí)驗(yàn)研究[D];南方醫(yī)科大學(xué);2015年

6 方永超;環(huán)氧化酶-2和miR-143在骨肉瘤中的表達(dá)和臨床意義[D];南方醫(yī)科大學(xué);2015年

7 趙健;microRNA-21在骨肉瘤細(xì)胞MG63中作用機(jī)制的研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2015年

8 韓康;microRNA-194在骨肉瘤中作用及機(jī)制的研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2015年

9 朱U，

本文編號：1573978