本文關(guān)鍵詞： 鏈霉菌 相容性溶質(zhì) 四氫嘧啶 ectABC基因簇　出處：《西北農(nóng)林科技大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版)》2017年06期 　論文類型：期刊論文

【摘要】：【目的】對(duì)生防密旋鏈霉菌Act12中的四氫嘧啶合成基因簇進(jìn)行鑒定及功能分析�！痉椒ā繉�(duì)田間生防效果良好的密旋鏈霉菌Act12進(jìn)行鹽耐受能力檢測(cè),采用體積分?jǐn)?shù)80%的乙醇抽提其胞內(nèi)四氫嘧啶,分別通過(guò)TLC和HPLC進(jìn)行定性及定量檢測(cè)四氫嘧啶。通過(guò)Act12全基因組分析,克隆得到Act12中四氫嘧啶生物合成基因簇ectABC,將其與表達(dá)載體pET-28a連接,轉(zhuǎn)化至大腸桿菌BL21(DE3)中,檢測(cè)工程菌株的鹽耐受能力�！窘Y(jié)果】密旋鏈霉菌Act12可在NaCl質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0%~10.0%的條件下生長(zhǎng),且能夠生產(chǎn)相關(guān)耐鹽相容性溶質(zhì)四氫嘧啶。當(dāng)NaCl質(zhì)量分?jǐn)?shù)為2.5%時(shí),密旋鏈霉菌Act12胞內(nèi)的四氫嘧啶積累量達(dá)到最大值,為72.39mg/L。生物信息學(xué)分析結(jié)果表明,組成ectABC基因簇的3個(gè)基因ectA、ectB、ectC位于同一個(gè)操縱子上,分別編碼二氨基丁酸乙�；D(zhuǎn)移酶、二氨基丁酸氨基轉(zhuǎn)移酶和四氫嘧啶合成酶。通過(guò)克隆得到長(zhǎng)2 408bp的ectABC基因簇,并使其成功在大腸桿菌中實(shí)現(xiàn)異源表達(dá),通過(guò)Ni柱純化得到了EctA蛋白。但含pET28a-ectABC的大腸桿菌BL21(DE3)在本試驗(yàn)條件下,其鹽耐受能力并無(wú)明顯改善。【結(jié)論】生防鏈霉菌Act12中存在四氫嘧啶合成基因簇ectABC,且能夠在大腸桿菌中成功異源表達(dá)。
[Abstract]:[Objective] to biocontrol Streptomyces Act12 in dense spin four hydrogen pyrimidine synthesis gene cluster analysis and identification function. [method] the prevention effect is good. Salt tolerance ability of Streptomyces Act12 spin detection field, the volume fraction of 80% ethanol extract of the four intracellular hydrogen pyrimidine, respectively by TLC and HPLC the qualitative and quantitative detection of four hydrogen pyrimidine. By Act12 whole genome analysis, cloned Act12 four hydrogen pyrimidine biosynthetic gene cluster of ectABC, which is connected with the expression vector pET-28a and transformed into Escherichia coli BL21 (DE3), salt tolerance test engineering strain. [results] the dense spin Streptomyces Act12 could grow in NaCl quality score is 0%~10.0%, and can be related to the production of salt tolerant compatible solutes four hydrogen pyrimidine. When the content of NaCl was 2.5%, four hydrogen density of Streptomyces Act12 intracellular pyrimidine spin accumulation reached the maximum value of 72.. 39mg/L. bioinformatics analysis showed that 3 genes ectA, ectABC gene cluster ectB, ectC located in the same operon, respectively encoding two amino acid acetyltransferase, two GABA aminotransferase and four hydropyrimidine synthetase. Long ectABC gene cluster of 2 408bp by cloning, and make it the successful implementation of heterologous expression in Escherichia coli, the EctA protein was purified by Ni column. But the Escherichia coli BL21 containing pET28a-ectABC (DE3) under the experimental conditions, the salt tolerance was not significantly improved. [Conclusion] biocontrol Streptomyces Act 12 four hydrogen pyrimidine biosynthesis gene cluster ectABC, and heterologous expression of success in Escherichia coli.

【作者單位】： 西北農(nóng)林科技大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院;西北農(nóng)林科技大學(xué)資源環(huán)境學(xué)院;
【基金】：中央高校基本科研業(yè)務(wù)費(fèi)專項(xiàng)(Z109021426,Z109021432) 高校博士點(diǎn)基金項(xiàng)目(Z20120204120034,Z20120204120042) 陜西省農(nóng)業(yè)科技創(chuàng)新與攻關(guān)項(xiàng)目(2015NY066)
【分類號(hào)】：S476.1

【參考文獻(xiàn)】

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【共引文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：1547991