本文關(guān)鍵詞： 梔子 類胡蘿卜素剪切雙加氧酶 基因 克隆　出處：《生物技術(shù)》2016年01期 　論文類型：期刊論文

【摘要】：[目的]類胡蘿卜素剪切雙加氧酶(Carotenoid cleavage oxygenase,CCD)是西紅花總苷生物合成途徑的關(guān)鍵酶,本研究擬從梔子果實中克隆CCD基因。[方法]在NCBI數(shù)據(jù)庫中搜索CCD蛋白,獲得種子序列后,構(gòu)建系統(tǒng)進化樹,按照親緣關(guān)系分組。再利用CODEHOP法,針對每個組設(shè)計簡并引物,在梔子果皮和果肉c DNA中擴增,獲得保守區(qū)段。然后通過RACE獲得基因全長。構(gòu)建pet28a原核表達(dá)載體,轉(zhuǎn)化BL21(DE3)菌株后在30℃培養(yǎng)4 h,轉(zhuǎn)化菌株Aritic Expression(DE3)后在15℃培養(yǎng)過夜,誘導(dǎo)蛋白表達(dá)。[結(jié)果]克隆了一個GjCCD4基因,長1 863 bp,編碼的蛋白質(zhì)N端序列變動較大,C端保守性強,N-末端含有一個葉綠體定位的信號肽。系統(tǒng)發(fā)育分析表明,GjCCD4蛋白與擬南芥和西紅花的同源蛋白聚在同一個簇。在BL21(DE3)和AE(DE3)菌株的沉淀中表達(dá)出大量包涵體形式的融合蛋白,在BL21(DE3)菌株的上清中表達(dá)出少量可溶蛋白。[結(jié)論]獲得了一個類胡蘿卜素剪切雙加氧酶基因GjCCD4,通過原核表達(dá)獲得了少量可溶蛋白。
[Abstract]:[Objective] carotenoid shear dioxygenase (Carotenoid cleavage, oxygenase, CCD) is a key enzyme in the biosynthesis of crocin from gardenia fruit, this study intends to clone CCD gene. Methods search CCD protein in the NCBI database, seed sequences, phylogenetic tree, grouped according to their relationships. Using the CODEHOP method, for each group of degenerate primers and amplified in Gardenia peel and pulp C DNA, obtain the conserved segment. Then obtain the full-length genes by RACE. Prokaryotic expression vector of pET28a was constructed, and transformed into BL21 (DE3) strain at 30 C 4 h culture, strain Aritic Expression (DE3) to cultivate. At 15 DEG C, induced protein expression. The cloning of a GjCCD4 gene, 1863 BP in length, encoding protein N terminal sequence changes, C terminal conservative, N- terminal signal peptide containing a chloroplast localized system development. Analysis showed that GjCCD4 protein homology with Arabidopsis and saffron together in the same cluster. In BL21 (DE3) and AE (DE3) expression of a large number of inclusion bodies in the form of fusion protein strains in the precipitation of BL21 (DE3) on the expression of a small amount of soluble protein. Conclusion] to obtain a carotenoid shear dioxygenase gene of strain GjCCD4 was obtained, a small amount of soluble protein by prokaryotic expression.

【作者單位】： 江西民族傳統(tǒng)藥現(xiàn)代科技與產(chǎn)業(yè)發(fā)展協(xié)同創(chuàng)新中心/江西中醫(yī)藥大學(xué);江西省中藥種質(zhì)資源工程技術(shù)研究中心/江西中醫(yī)藥大學(xué);桂林醫(yī)學(xué)院;
【基金】：江西省自然科學(xué)基金項目(“梔子玉米黃素剪切加雙氧酶基因的克隆與功能分析”,No.20122BAB205070)資助 國家自然科學(xué)基金項目(“梔子果實中西紅花總苷合成途徑CCD基因的篩選與功能分析”,No.31360362)資助
【分類號】：Q943.2

【共引文獻(xiàn)】

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本文編號：1547976