本文關(guān)鍵詞： 幽門螺桿菌 耐藥 甲硝唑 克拉霉素 左氧氟沙星　出處：《青島大學(xué)》2016年博士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：目的:幽門螺桿菌(Helicobacter pylori,Hp)為革蘭氏陰性、微需氧的彎曲狀桿菌。根除Hp可有效緩解胃粘膜炎性反應(yīng),有助于治愈潰瘍,預(yù)防消化性潰瘍病的復(fù)發(fā)及緩解胃MALT淋巴瘤;早期根除Hp可以在一定程度上降低胃癌發(fā)生的風(fēng)險(xiǎn)。Hp耐藥性具有明顯的地區(qū)差異,本研究通過(guò)觀察分析青島地區(qū)臨床分離Hp菌株對(duì)甲硝唑、克拉霉素和左氧氟沙星抗生素的單一耐藥和多重耐藥情況,探討Hp耐藥與良、惡性慢性胃病和菌株毒力基因型的相關(guān)性,并分析耐藥基因rdx A、23S r RNA和gyr A的突變特征。方法:從胃竇粘膜標(biāo)本分離培養(yǎng)Hp,經(jīng)細(xì)菌菌落形態(tài)學(xué)、酶學(xué)試驗(yàn)、革蘭氏染色及16S r RNA序列分析鑒定菌株;應(yīng)用瓊脂稀釋法藥敏試驗(yàn)分別檢測(cè)Hp菌株對(duì)甲硝唑、克拉霉素和左氧氟沙星的敏感性;應(yīng)用PCR方法檢測(cè)Hp毒力基因型(cag A和vac A),分析Hp菌株耐藥與毒力基因型的相關(guān)性;采用測(cè)序技術(shù)對(duì)Hp甲硝唑耐藥基因rdx A、克拉霉素耐藥基因23S r RNA和左氧氟沙星耐藥基因gyr A的PCR產(chǎn)物核苷酸序列進(jìn)行分析,采用DNAMAN軟件對(duì)耐藥基因突變特征進(jìn)行序列比對(duì)分析。結(jié)果:1.本研究共分離出101個(gè)Hp菌株,并且經(jīng)菌落形態(tài)學(xué)、酶學(xué)試驗(yàn)、革蘭氏染色及16S r RNA序列分析鑒定后證實(shí)。2.藥敏檢測(cè)結(jié)果發(fā)現(xiàn),僅17.8%(18/101)Hp菌株對(duì)甲硝唑、克拉霉素和左氧氟沙星三種抗生素均敏感。臨床分離的Hp菌株對(duì)甲硝唑、克拉霉素和左氧氟沙星三種抗生素單一耐藥率分別為43.6%、40.6%和34.6%。101株Hp中,有30.1%(31/101)同時(shí)對(duì)兩種或兩種以上抗生素耐藥。雙重耐藥的Hp菌株中,克拉霉素+左氧氟沙星耐藥率最高,達(dá)10.9%(11/101);而左氧氟沙星+甲硝唑耐藥率最低,為3.0%(3/101),二者差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=4.91,P=0.027)。這提示青島地區(qū)Hp臨床分離株對(duì)左氧氟沙星+甲硝唑聯(lián)合用藥最為敏感。Hp臨床分離株三重抗生素耐藥比例為8.9%(9/101)。上述結(jié)果表明多重耐藥Hp菌株比例在青島地區(qū)較高,這將嚴(yán)重影響臨床根除Hp治療的效果。3.Hp耐藥與疾病相關(guān)性分析結(jié)果發(fā)現(xiàn),胃癌組患者菌株耐藥率為33.3%(18/54),明顯低于慢性胃炎組菌株(55.3%,26/47),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=4.94,P=0.029)。本結(jié)果提示胃癌及其胃內(nèi)微環(huán)境可能是影響Hp對(duì)甲硝唑的耐藥的因素。慢性胃炎組Hp菌株對(duì)克拉霉素和左氧氟沙星耐藥率與胃癌組菌株差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。4.Hp耐藥與毒力基因型相關(guān)性分析結(jié)果可見(jiàn),毒力基因cag A+以及vac A各亞型在甲硝唑、克拉霉素和左氧氟沙星敏感株與耐藥株的分布頻率差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。本結(jié)果提示Hp毒力基因型與上述三種抗生素耐藥無(wú)相關(guān)性。5.耐藥基因序列分析表明青島地區(qū)rdx A基因最常見(jiàn)突變位點(diǎn)為第20核苷酸位點(diǎn)插入A,產(chǎn)生移碼突變從而導(dǎo)致第23個(gè)氨基酸位點(diǎn)出現(xiàn)終止密碼子,引起rdx A基因功能失活,這種情況占總耐藥株的43.2%;大多數(shù)單核苷酸插入/缺失發(fā)生在單核苷酸重復(fù)序列位置,占59.1%(26/44),尤以串聯(lián)重復(fù)堿基A多見(jiàn)。23S r RNA基因最常見(jiàn)突變位點(diǎn)為A2143G(78.1%),gyr A基因突變最常見(jiàn)的突變位點(diǎn)為N87K(80.0%)。結(jié)論:1.青島地區(qū)臨床分離Hp菌株呈現(xiàn)為高克拉霉素耐藥率和高多重耐藥率,因此有必要根據(jù)藥敏檢測(cè)結(jié)果選擇有效的治療方案。左氧氟沙星可作為本地區(qū)根除Hp治療方案的一線用藥。2.本研究首次發(fā)現(xiàn)胃癌患者H p菌株的甲硝唑耐藥率低,這可能與胃癌患者胃內(nèi)亞硝酸鹽濃度升高有關(guān)。3.通過(guò)對(duì)Hp甲硝唑耐藥株rdx A突變位點(diǎn)分析,證實(shí)插入/缺失突變最常發(fā)生在單核苷酸串聯(lián)重復(fù)序列中。本研究結(jié)果對(duì)于指導(dǎo)臨床治療,進(jìn)一步闡明甲硝唑耐藥機(jī)制提供了新的思路。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：青島大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R446.5

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